Auteurs: ADLI BEN ZIANE et YOUSFI ISMAIL
Mode opératoire :
L'hydrodistilation est réalisée à l'aide de l'appareil type clevenger : on a met 50 g de masse végétal préalablement préparé, dans le ballon avec une quantité suffisante d'eau, puis on porte à ébullition sur un chauffe-ballon pendant 04 heures, la vapeur d'eau entraîne l'huile volatile le long de la colonne verticale vers le réfrigérant où elle se condense et se transforme en liquide, sous l'influence de différence de densité de l'huile et de l'eau, il résulte une séparation des deux. Puis nous récupérons notre huile essentielle qui nous sert à tester leur effet antibactérien.
1. Test d’activité antibactérien :
La méthode utilisée pour tester la sensibilité des bactéries à l'huile essentielle de Pistacia atlantica Desf.; est la méthode de disques (diffusion) elle est souvent utilisée pour tester la sensibilité bactérienne aux antibiotiques, dont on passe par plusieurs étapes pour arriver à mesurer l'effet antibacterien de l'extrait.
2. Culture bactérienne :
Dans des tubes à essai de bouillon nutritif, des souches bactériennes été cultivées pendant 18 heures, on prend un inoculum et on le met dans l'eau physiologique, puis en agitant et on le compare avec l'étalon, jusqu'à ce qu'elles deviennent semblables de point de vue couleur (densité).
3. Dilution :
Avec une micro-pipette et ces empouts spéciaux et des bouteilles stériles et de l'éthanol pour la dilution.
Les dilutions à faire sont : 1/2, 1/5, 1/10 V/V.
Exemple : 1/10 signifie qu'il faut 1 µl (microlitre) d'huile essentielle plus 9 µl d'éthanol.
On doit mettre ces dilutions dans un réfrigérant pour que l'éthanol ne s'évapore pas.
4. Ensemencement :
On doit bouillir le milieu de culture gélose Mûller-Hinton jusqu'à qu'il sera fondu puis on doit le couler dans des boites de pétri, puis on le laisse se solidifier à la température ambiante. L'ensemencement consiste à procéder à un écouvillonage au moyen d'un écouvillon
L'écouvillonage, consiste à prendre l'inoculum à l'aide d'un écouvillon, une fois chargé, on le passe délicatement par un mouvement de va et vient sur toute la surface de la boite de pétri. En veillant à ce que tous les côtés de la boule d'ouate soient mis en contact avec le milieu solidifié.
Après l’ensemencement un disque (6 mm de diamètre) de papier (Whatemann n°1), stérilisé et imprégné de 10 µl de différentes concentrations d'huile de Pistacia atlantica Desf dans chacune des boites de pétri, on dépose 03 disques de même concentration sous forme de triangle équidistant de 24mm pour chacune des bactéries (Gram positif et Gram négatif).
On dépose aussi 03 disques imprégnés de 10 µl chacune d’huile essentielle dans une boite de pétri sous forme d’un triangle équidistant de 24 mm.
On dépose 3 disques qui imprégnés de 10µl chacune d’éthanol dans une boite de pétri sous forme d’un triangle équidistant de 24 mm.
On dépose 3 disques qui imprégnés de 10µl chacune de Gentamicine dans une boite de pétri sous forme d’un triangle équidistant de 24 mm.
5. L'incubation :
Nous incuberons par la suite nos bactéries dans une étuve pendant 18 heures à 37 °C, enfin nous mesurons l’halo d’inhibition.