TP Antibiogramme

Le médecin en charge du jeune garçon suspecte que l’antibiotique prescrit chez le jeune garçon de 5 ans n’a pas réussi à éliminer la bactérie E. coli (Escherichia coli) d’où l’apparition de symptômes graves au bout de 3 jours.

À l’aide des informations ci-dessous, proposer une stratégie expérimentale qui permettra de confirmer votre diagnostic et de proposer un nouveau traitement.

Document 1

Les Escherichia coli sont des bactéries de l’intestin très communes chez l’humain où elles représentent 80% du microbiote et aident à la digestion. La majorité des souches de E. coli sont inoffensives, quelques-unes seulement sont pathogènes pour l’homme.

Document 2

Croissance bactérienne et mise en culture des bactéries.

Les bactéries se reproduisent par division cellulaire. C'est à dire qu'une bactérie va donner deux bactéries par mitoses

successives toutes les 20 à 30 minutes.

Les bactéries sont cultivées dans des boîtes de Pétri sur un gel où elles trouvent tout ce qu'elles ont besoin pour se

reproduire (eau, sucre, éléments minéraux).

Document 3

Materiel

Par binômes

- 2 charlottes

- alcool

- 1 réchaud

- 1 pot « poubelle »

- 1 feutre

- microtube contenant la culture d’ Escherichia Coli (E-Coli) en suspension

- 2 Boites de pétri avec milieu nutritif

- 1 chronomètre

- micropipette P1000 et embouts

- 2 pinces fines

Pour le groupe :

- tubes contenant des disques de cellulose imprégnée :

* d’ampicilline (AP ou AM ou Amp)

* d’acide nalidixique (NA)

* de pénicilline (PG ou P)

* de tétracycline (Te ou T)

- 1 vortex

PROTOCOLE EXPERIMENTAL

Par binôme, réaliser deux antibiogrammes (un chacun), l’un après l’autre (=réplicats).

1/ TRAVAILLER EN CONDITIONS STÉRILES

Attacher vos cheveux si besoin
Mettre la charlotte.
Désinfecter la paillasse (alcool + essuie tout)
Allumer le réchaud pour créer un périmètre stérile tout autour.
Se laver soigneusement les mains au savon ou au gel hydroalcoolique (d’abord les 1ers à manipuler puis les autres).
Maintenir le matériel et travailler dans ce périmètre.

2/ ENSEMMENCER CHAQUE BOITE DE PETRI AVEC LA SOUCHE BACTERIENNE

Chaque personne du binôme manipule l’une après l’autre.

Annoter le côté du couvercle de la boîte au feutre indélébile : Prénom, date, nom de la souche.
Homogénéiser rapidement la suspension de bactéries (petit tube) au vortex.
À l’aide de la micropipette, prélever 1000 microL de la suspension notée « E.coli ».
Déposer ce liquide sur la gélose de la boîte de pétri maintenue entrouverte le moins longtemps possible. Remettre le compte-goutte dans son emballage pour pouvoir le réutiliser.
Après avoir refermé le couvercle, répartir le liquide uniformément sur la surface de la gélose.
A l’aide du compte-goutte, verser l’excédent de liquide dans le pot « poubelle » TOUT EN RESTANT DANS LA ZONE STERILE. (pencher la boite sur un côté pour récupérer l’excédent)
Placer le couvercle « à moitié » sur la boîte de façon à la laisser entrouverte près de la lampe.
Laisser sécher au moins 15 minutes. Déclencher le chronomètre après que les deux personnes ont terminé leur manipulation.
Se laver les mains et commencer à lire les DOCS 1 et 2 pour répondre à la deuxième partie de l’étape 2 (reculez-vous de la lampe et des boites entrouvertes).

3/ REALISER L’ANTIBIOGRAMME

Après au moins 15 minutes : se laver les mains.
En travaillant dans la zone stérile, ouvrir le couvercle de la boite de pétri
À l’aide de pince stérilisée au bec électrique et refroidie, déposer les 4 disques antibiotiques (Les disposer régulièrement et respecter une distance minimale par rapport au bord de la boîte de 15 mm à utiliser le gabarit fourni).
Avec la pince, appuyer légèrement sur chacun des disques pour les faire adhérer à la gélose.
Procéder de cette façon pour tous les antibiotiques en veillant à stériliser la pince à la flamme entre chaque prélèvement.
Fermer le couvercle.
Donner les boites au professeur qui les mettra en culture pour 24-48h entre 25 et 35°C. Rappel : les boites doivent être placées couvercle en bas.

4/ RANGER, DÉSINFECTER.

Ranger le matériel.
Désinfecter la paillasse à nouveau avec des lingettes désinfectantes, se laver les mains.

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