Partie1 / Extraction de l' ADN d'un être vivant ( fruit ou viande)

Cette manipulation est un exemple de technique d’extraction de molécules intracellulaires. Elle permet d’extraire les molécules d’ADN contenues dans les cellules : il est possible alors d’observer la structure filamenteuse de cette molécule.

I-Principe de la manipulation

L’extraction de l’ADN est réalisée sur un végétal, ou d'un animal. La manipulation consiste à récupérer l’ADN contenu au cœur des cellules.

Schéma d’une cellule végétale

Ø Activité : (retrouver les légendes des cette cellule, préciser si il s’agit d’une cellule eucaryote , justifer), localiser l’ADN en coloriant en rouge sa position)

La technique d’extraction comporte plusieurs étapes :

1-destruction mécanique des cellules (éclatement du tissu végétal et des cellules).

2-destruction chimique des membranes biologiques.

3-précipitation de l’ADN extrait (apparition sous une forme non soluble).

II-Manipulation

1-Matériel et réactifs

-1 oignon, un scalpel

-du sel de cuisine ( NACL)

Cette solution permet d’inactiver des enzymes cellulaires qui pourraient dégrader l’ADN que l’on cherche à extraire.

-1 solution de détergent + pipette.

Cette solution permet de dissoudre les composés lipidiques cellulaires.

-1 solution d’éthanol à 90° maintenue dans la glace.

Cette solution permettra de visualiser la présence d’ADN.

-1 mortier + pilon.

-1 bécher + 1 Erlenmeyer.

-1 entonnoir + papier filtre (ou gaze repliée).

2-Mode opératoire

a-Préparation du tissu

Récupérer dans le mortier la chair du végétal en coupant celle-ci en petits morceaux

Broyer la chair à l’aide du pilon(par mouvements rotatifs), et transférer le tout dans un bécher. Prendre soin de récupérer le maximum de chair lors du transfert.

b-Traitement des cellules

Ajouter une pincée de sel et 40 ml d'eau, puis 15 gouttes de solution détergente. Mélanger doucement à l’aide de la spatule pendant environ 20 secondes.

Filtrer le contenu du bécher sur la gaze, et récupérer le filtrat dans l’Erlenmeyer. Presser légèrement et très délicatement le filtre pour récupérer un maximum de filtrat.

c-Visualisation de l’ADN

Homogénéiser doucement le contenu de l’Erlenmeyer, puis transférer 10 mL de ce filtrat dans le tube à essai. Ajuster ensuite le volume jusqu’à 40 mL avec la solution froide d’éthanol à 90° (verser très délicatement et lentement la solution d’éthanol).

Laisser reposer le contenu de l’éprouvette pendant quelques minutes. L’ADN apparaît sous forme d’une pelote blanche.

Ø Activité : Réaliser une schéma du tube a essai à la fin de l'expérience , légendez-le

Ø Décrire le résultat obtenu avec le même protocole sur la chose mystérieuse, conclure