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Antoine passe ses journées d’été à la plage sans protéger sa peau des rayons du soleil. Ses amis lui expliquent que les rayonnements ultraviolets sont très néfastes : ils seraient responsables de mutations à l’origine de cancers de la peau voire de la mort de certaines cellules. Ils lui conseillent de réduire sa durée d’exposition aux rayons UV et d’éviter les coups de soleil afin de réduire les risques.
En vous aidant des documents ci-dessous, proposer une stratégie permettant de déterminer si la durée d’exposition aux UV augmente effectivement la fréquence des mutations au sein des cellules et/ou la mortalité des cellules.
Materiel
- levures ade2 souche rouge
Par binôme
-Lunettes(à utiliser OBLIGATOIREMENT sous la lampe UV)
-Gants (à utiliser OBLIGATOIREMENT sous la lampe UV)
-Une suspension de levures roses ADE2
-Une boîte de Pétri contenant un milieu nutritif complet.
-pipettes 200 et embouts
-Un râteau à ensemencer jetable sous emballage stérile.
-DASRI (= poubelle)
-bec électrique
-feutre
-chronomètre
En commun
-Une hotte à UV
Protocole
Réalisation d’un champ stérile :
Se laver les mains soigneusement jusqu’aux poignets
Mettre la blouse. ATTACHER LES CHEVEUX LONGS
Désinfecter la zone de travail (lingettes)
Allumer le bec électrique pour créer un périmètre stérile tout autour (voir ci-contre)
Ne pas parler / éternuer / postillonner
Ne pas faire de gestes brusques et amples
Organiser de façon logique tout le matériel à utiliser dans le périmètre stérile
Dépôt des levures Ade2 sur la gélose
Prendre une boîte de Pétri contenant un milieu nutritif complet pour les levures.
Sans l’ouvrir indiquer vos initiales, 254 ou 365 (pour les longueurs d’onde testées) ainsi que le temps d’exposition aux UV (nbre de secondes), à l’aide du feutre sur le côté du couvercle de la boîte (le dessus du couvercle doit rester libre de toute inscription pour une bonne lecture des résultats).
Placer la(les) boite(s) de pétri en conditions stériles
Homogénéiser la suspension de levures (petit tube) si elles ont sédimenté au fond du tube.
Déposer 100 microlitres (avec la micropipette + embout) de suspension de levures au centre de la gélose de chacune de vos deux boîtes de Pétri maintenue entrouverte le moins longtemps possible.
Exposition aux UV des levure Ade2
Les UV sont mutagènes et carcinogènes. Ils affectent également les yeux.
NE JAMAIS REGARDER DIRECTEMENT UNE LAMPE UV.
Eviter les "coups de soleil" sur les mains en portant des gants.
Porter des longues manches pour protéger les avant-bras. Porter des lunettes de protection
Transporter vos boîtes FERMEES près de la hotte à UV,
Placer une des boîtes dans l’enceinte, ôter le couvercle et le déposer (retourné : intérieur vers le haut) à côté de la boite dans l’enceinte.
Démarrer le chronomètre afin d’exposer la culture de levure durant le temps d’exposition imposé.
Prévoir un témoin : aucune exposition aux UV.
Refermer la boîte avec son couvercle, la sortir de la hotte, la scotcher
N’exposer pas la boîte à une trop forte intensité de lumière visible après la mutagenèse.
Répéter ces opérations pour l’autre boite.
Etalement des levure Ade2
REPLACER VOS BOITES DANS LA ZONE DE STERILITE
Dans chacune des boites, étaler les levures avec un râteau de plastique stérile en maintenant le couvercle entrouvert jusqu’à ce que la surface de la gélose soit sèche (les levures entrent dans la surface d’agar, sinon elles coulent lors du déplacement de la boîte et leur répartition n’est plus homogène). Toute la surface de la boîte doit être régulièrement « ratissée »…même les bords.
Fermer les boites.
Les porter dans l’incubateur à 30 °C.
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