К методике сбора и сохранения биологического материала от птиц на орнитоз и арбовирусные инфекции
Старший научный сотрудник В. С.Греков
Долгое время люди считали, что у нас птицами нет общих заболеваний.
Лично меня в этом убедила учительница по зоологии, что в дальнейшем сослужило мне плохую службу. Положение стало проясняться лишь с ХIХ века, когда пришлось расшифровывать опасные нетипичные с точки зрения тех знаний заболевания. В настоящее время многое уже сделано в этом плане, но ещё остаётся немало, что предстоит сделать.
Роль птиц как самого многочисленного и подвижного класса позвоночных в поддержании и распространении особоопасных инфекций переоценить трудно. На Земле число их превышает 8000 видов (Птицы СССР, тт. 1 – 6), в СНГ не менее 700, а Северном Причерноморье 325 видов и число их пополняется за счет новых находок и залётных форм.
С медицинской точки зрения наиболее интересны виды птиц, совершающие дальние, порой межконтинентальные миграции. Они могут
распространять инфекции путем переноса их в своём организме и транспортируя на себе присосавшихся инфицированных клещей.
Из многих особоопасных заболеваний, в том числе экологически связанных с птицами, Украинский научно-исследовательский противочумный Институт им. И. И. Мечникова в настоящее время изучает орнитоз и арбовирусные инфекции.
Подлинное изучение орнитоза и арбовирусов, экологически связанных с птицами, стало возможным после практически почти одновременного выделения возбудителей заболеваний: в Европе – сразу тремя исследователями во время эпидемии орнитоза 1929-1930 гг. и в Америке при расшифровке эпидемий и эпизоотий в 1930 г., вызванными вирусами энцефаломиелитов лошадей.
Заражение млекопитающих орнитозом чаще происходит аэрогенно с первичной локализацией возбудителя в лёгких, вызывая острые, латентные и хронические формы заболеваний. Однако по данным Ю. А. Ильинского (1974) далее создаётся впечатление, что поражается весь организм человека, так как клиническая картина заболевания столь разнообразна, что, пожалуй, нет такого заболевания, с которым она не была бы клинически схожа и поэтому без лабораторных исследований может быть принята за что угодно.
Птицы заражаются преимущественно через воду и пищу. Сначала локализация возбудителя происходит в кишечнике, затем поражаются внутренние органы. В острой фазе птица выглядит вялой, из-за диареи перо испачкано пометом, вокруг глаз гнойные очки, крылья опущены. Широко распространены бессимптомные инфекции. Причем разные виды не одинаково чувствительны к орнитозу. Так, у волнистых попугайчиков инфекция протекает бессимптомно, но от них можно заразиться, а у яванских воробьёв (рисовые трупиалы), заболевание всегда проходит остро и почти с поголовной гибелью.
Арбовирусы – экологическая группа, таксономически не родственных вирусов, передающихся позвоночным через укус кровососущего членистоногого (клещи, комары, мокрецы и пр.). Хотя гамма клинических проявлений инфекций широка, но они, прежде всего, проявляются в поражениях центральной нервной системы и в виде различных лихорадок. Наряду с острыми формами встречаются бессимптомные течения арбовирусной инфекции.
Поскольку обе инфекции связаны с птицами, то от каждой особи следует брать материал для исследований из расчета на оба заболевания.
Если птица обследуется прижизненно, необходимо осмотреть её на клещей, которые большей частью присасываются вокруг глаз и ушных отверстий. Если таковые найдены, то их, осторожно покачивая, чтобы не повредить, снимают глазным пинцетом и помещают в увлажнённые энтомологические пробирки, которые хранят при 4оС. Далее необходимо взять кровь для серологических и вирусологических исследований - лучше из подкрыльцовой вены. Кстати, вены у птиц состоят из мускулатуры отличной от вен млекопитающих и при использовании толстых иголок образуются обширные гематомы. В современных условиях для забора крови лучше использовать стерильные одноразовые шприцы с умеренной толщины иголками. При этом следует немедленно перелить кровь в стерильную пробирку, так как у большинства птиц кровь сворачивается очень быстро и тогда не удастся её извлечь из шприца. После образования сгустка сыворотка крови отсасывается и с целью длительного хранения замораживается при -20о или
-40оС лучше небольшими порциями. При некоторых инфекциях (Колорадская лихорадка, Денге) вирус сохраняется в лейкоцитах, поэтому целесообразно в часть крови для вирусологических исследований добавлять антикоагулянты (гепарин). Если сыворотка используется только в серологических реакциях, то её можно сохранять с помощью антибиотиков, мертиолята или кристалликов борной кислоты. Возбудители циркулируют в крови не более 10 дней. Выделить их чаще удаётся в первую половину этого срока. Американскому ученому Гарри Хугстраалу, работая в дельте Нила, удалось изолировать из крови, мигрирующих осенью и весной мелких воробьиных, ряд арбовирусов.
Если птица предназначена для полного обследования, то в первую очередь тотально забирается кровь путём рассечения сонной артерии. Для исследований на арбовирусы извлекается мозг, который, поскольку арбовирусы не стойки, лучше сохранять в жидком азоте. Для 2-5 дневного хранения пригодны термоконтейнеры с твердой углекислотой. Для хранения мозга не более 1-2 дней можно использовать широкогорлые термосы со смесью поваренной соли и льда. Кроме того, мозг можно хранить в 50% забуференном глицерине при 4оС. При этом лучшему сохранению вирусов способствует добавление сывороточного альбумина (2%) и сыворотки (25%). Далее вскрывается грудобрюшная полость и стерильно берётся материал от печени и селезёнки для изоляции возбудителя орнитоза, который более стоек, чем арбовирусы, к условиям внешней среды и может до отправки в лабораторию храниться в контейнерах с сухим льдом, в широкогорлых термосах со льдом и даже в холодильниках при 4оС.
Затем без соблюдений антисептики отрезаются маленькие кусочки печени и селезёнки для приготовления мазков-отпечатков, отмываются в физиологическом растворе (обычно поочередно в 2-х чашках Петри), после чего материал высушивается на фильтровальной бумаге. Далее на обезжиренных в смеси Никифорова предметных стеклах производят мазки отпечатки, которые высушиваются на воздухе и фиксируются в ацетоне. На заматированной части предметного стекла делают простым карандашом необходимые записи.
Поскольку дальнейшая работа с исследуемыми инфекциями относится к 1-ой категории сложности и может проводиться только в специализированных лабораториях, то полевой материл с соблюдением необходимого медицинского режима при транспортировке особоопасных инфекций и соблюдением сохраняющих параметров температур доставляется в базовый отдел противочумного института на Церковную 2.
03.06.2003г.