Citometría de flujo
Citometría de flujo (CMF) es una técnica de análisis celular multiparamétrico que permite detectar diferentes propiedades tanto estructurales como funcionales en poblaciones celulares. Se basa en la excitación de moléculas fluorescentes por medio de estimulación laser y su detección a través de fotomulplicadores y la posterior conversión a una señal digital. Es utilizada para el recuento y la clasificación celular, la detección de biomarcadores e ingeniería de proteínas entre otros.
BDB_BD-FACSCalibur-Flow-Cytometry-BR-TR.pdf
Prácticos:
1.- Calibración Citometría de Flujo:
Un correcto registro debe ser capaz de separar con claridad la señal del ruido, el cual en el caso de la Citometría de flujo depende directamente del funcionamiento de sus filtros de emisión/excitación, de los fotomultiplicadores y de la correcta configuración de los parámetros digitales de adquisición. Mediante el uso de beads fluorescentes se puede determinar la capacidad del equipo de discriminar óptimamente 4 señales fluorescentes simultáneas. Desafío: Analizar distintas señales fluorescentes simulatáneamente
2.- Determinación de la Muerte celular según modelo AVD:
La muerte celular es un proceso multifactorial que termina con la perdida de los gradientes electroquímicos de la células fusionándose con el medio externo. En la actualidad existen diversos métodos de evaluación del proceso, siendo la citometría de flujo relevante por su capacidad de medir 6 parámetros simultáneamente. Mediremos el curso temporal de la muerte celular inducida por estrés oxidatívo y ajustaremos los resultados a un modelo cinético de muerte celular: vivas-vulnerables-muertas (AVD). Desafío: Proponer un modelo cinético de muerte celular a partir del registro fluorescente de parámetros homeostáticos.
3.- Laboratorio de Citometría en sangre
Cuantificar las subpoblaciones de linfocitos, monocitos y granulocitos.
Demuestre que la expresión de CD8 es específica para una población celular
¿Cuál es el porcentaje de células CD8+ en la subpoblación?