PVLG é usado para montar permanentemente em lâminas esporos inteiros ou quebrados de FMAs. Os espécimens montados não devem ser estudados por 2-5 dias após a montagem para permitir que o conteúdo dos esporos fique límpido.
Água destilada - 100 mL
Ácido Lático - 100 mL
Glicerol - 10 mL
Álcool polivinílico (PVA) - 16.6 g
Importante – misture todos os ingredientes num frasco âmbar escuro antes de adicionar o álcool polivinílico. O PVA dissolve lentamente e somente quando colocado em banho-maria (70 - 80oC). A solução ficará clara em 4-6 horas e nós deixamos geralmente a mistura por 1-2 dias em banho-maria até a dissolução completa do PVA. Pode-se estocar o PVLG em frascos escuros bem vedados por 1 ano.
O reagente de Melzer tem se tornado uma importante ferramenta para a identificação morfológica das espécies de FMAs. A reação ao iodo varia de rosa fraco (reação fraca) para marrom-avermelhado escuro (reação moderada) para purpura-avermelhado escuro (reação dextrinóide intensa). O iodo se liga as regiões hidrofóbicas das macromoléculas (da parede do esporo e paredes germinativas) e a intensidade da reação esta relacionada em parte ao comprimento das cadeias de carbohidratos. Na maioria dos casos, a intensidade da reação está diretamente correlacionada com a plasticidade da estrutura em meios de montagem ácidos.
Hidrato de Cloral - 100 g
Água destilada - 100 mL
Iodo - 1.5 g
Iodeto de Potássio - 5.0 g
Quando o reagente de Melzer é usado de acordo com a receita acima, as reações serão mais intensas. No entanto, as montagens serão temporárias mesmo quando a lamínula for selada e freqüentemente fica seco após 1-2 anos de estocagem. Meio de montagem mais permanente pode ser conseguido misturando o reagente de Melzer com PVLG (1:1, vol/vol) e estocando a mistura em um frasco escuro. A reação é diminuída um pouco, mas não ao ponto de causar erro na interpretação em relação a intensidade da reação. Em estruturas que coram fracamente, a cor da reação desaparece dentro de um ou dois anos após estocagem.
Ázida sódica é um inibidor da respiração e assim deve ser manuseada com muito cuidado (usando luvas) quando as soluções estoques são preparadas (2.5 g in 50 ml de água destilada). Uma alíquota de 1 ml da solução estoque é adicionada a 90 ml de água destilada para obter-se uma solução 0.05%, a qual é utilizada para estocar os esporos de FMAs.
Para “vouchers” em eppendorfs, os esporos são coletados e colocados em eppendorfs de 5 ml com um mínimo de água. O eppendorf é então preenchido com ázida sódica 0.05% e identificado com etiqueta (contendo o nome da espécie, código e data). Os esporos em eppendorfs com ázida sódica são estocados a 4oC para maior conservação.
Os esporos morrem em ázida sódica e começam a degradar naturalmente com o tempo. Eles começam a flutuar, o conteúdo geralmente fica escuro ou perde sua integridade (tornando-se condensado). Contudo, as estruturas subcelulares mantem sua integridade na maior parte. Outras soluções para preservar esporos têm sido utilizadas como FAA (Formol, Ácido acético e álcool) e lactofenol (ácido lático e fenol), mas evidências dos espécimens tipos de FMAs mostram que eles causam grandes mudanças ou degradação da estrutura subcelular dos esporos.