1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
7.0
原理：
1.1
1.2
1.3
同功酵素，是指催化同一化學反應，但在結構與物理特性方面有所不同的一群酵素，其特性方面的差異可明顯的表現在電泳分離時酵素分子間之相對距離上。
某些同功酵素具有基因多形性（polymorphism）之特性，來自不同種源之生物體，或同一生物體的不同組織，甚至同一種源同一組織之不同個體具有不同形式之同功酵素分布。
同功酵素經由電泳分離並以酵素基質反應並呈色作用後，呈顯不同位置之同功酵素圖譜，此圖譜稱之為Zymography，經由對細胞株Zymography圖譜作分析，即可得知該細胞株之種源和其正確性。
材料與設備
2.1 Cell Extraction Buffer : 4℃下保存。（INNOVATIVE CHEMISTRY）
2.2
2.3
2.4
酵素穩定劑（Enzyme Stabilizer Solution）：每Enzyme Stabilizer vial 加入1mL dH2O溶解，貯存於－20℃下，可保存一年。
對照組（Standard / Control）：Standard（NCTC clone 929）或Control（HeLa S3） lyophilized vial加入0.1mL酵素穩定劑，稀釋溶解，分裝10ul /tube，貯存於－20℃下，可保持一年，回溫解凍20次仍不失活性。
電泳液Electrophoresis buffer (0.05M, SAB plus buffer, pH 8.6 ): 一瓶裝25g SAB plus 8.6 buffer powder溶於2L dH2O，攪拌均勻待其完全溶解，約1hr，4℃下可保存6個月。
2.5 活性測定之酵素基質溶解液0.1M SAB plus buffer：
2.6 真空抽氣瓶裝置
2.7 無菌phosphate-buffer saline , D-PBS（GIBCO 21600-010）
2.8 無菌trypsin / EDTA：0.05% trypsin-0.53mM EDTA（GIBCO 25300-062）
2.9 無菌15ml離心管
2.10 無菌吸管（pipette）5ml, 10ml
2.11 電動吸管器（pipetacu）
2.12 低溫高速離心機
細胞的收集：多於107 細胞製備，預估生長至高緻密度（confluence）的T-75 flask，大約含有大於107 個細胞。
3.1 附著型細胞（attachment cell）
3.1.1 將confluent T-75 flask中原有培養基吸出8 ml，置於15 ml離心管中備用，其餘的培養基以真空抽氣瓶裝置抽除。
3.1.2 T-75 flask以無菌吸管加入8 ml D-PBS，洗滌（rinse）細胞一至二次，並抽掉D-PBS。
3.2 懸浮型之細胞
3.2.1 同步驟3.1.5至3.1.9
細胞蛋白質之抽取：
細胞酵素活性測定
5.1 材料：
5.1.1 酵素基質(Enzyme Substrate)：
5.1.1.1 NP (Nucleoside Phosphorylase)基質
5.1.1.2 G6PD (Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase)基質
5.1.1.3 MD (Malate Dehydrogenase)基質
5.1.1.4 LD (Lactate Dehydrogenase)基質
5.1.2 活性測定之酵素基質溶解液：0.1M SAB Plus Buffer
5.1.3 Quench-a-Zyme Reagent
5.1.4 計時器Timer
5.1.5 恆溫水浴槽Water Bath : (37℃)
5.1.6 2.5ml 針筒
5.1.7 1.5 ml 微量離心管
5.1.8 微量吸管Tip：20 ul，200 ul，1000 ul
5.1.9 Pipetman：P20，P200，P1000
5.1.10 微量離心管架
5.1.11 disposable cuvette
5.1.12 分光光譜儀Spectrophotometer ( A565 nm )
5.1.13 酵素活性∕電泳膠片記錄紙（Form 1）
5.2 活性測定
Table 1 : Maximum and Minimum Activity Levels Required for Electrophoretic Analysis, Using 1 microliter of Sample（From INNOWHTIVE, The AuthentiKit System）
同功酵素電泳分析
6.1 材料：
6.1.1 碎冰／冰桶
6.1.2 37℃恆溫箱
6.1.3 55℃ 烘箱（gel-dryer）
6.1.4 溫控電泳槽：含上層溫控注冰槽和下層電泳槽。
6.1.5 定時電源輸出器（160 volts DC）
6.1.6 Tip／Pipetman：2 ul, 200 ul／P2, P200
6.1.7 電泳液Electrophoresis buffer：0.05 M, SAB plus buffer, pH 8.6，4℃保存。
6.1.8 Agarose gels：室溫保存，不可低溫保存。
6.1.9 Standard and Control：-20℃保存。
6.1.10 Enzyme Stabilizer：-20℃保存。
6.1.11 電泳膠片呈色基質(Enzyme substrate)溶液：溶於0.5 ml ddH2O，可在冰上保持6 hr。
6.1.12 5 ml pipet
6.1.13 清洗槽（de-stain holder）
6.1.14 膠片清洗液：Deionized water
6.2 電泳分析
6.2.1 37℃incubator與55℃Gel Dryer打開電源，溫機。
6.2.2 將溫控電泳槽上層的注冰槽中充滿碎冰（4℃～10℃）。
6.4 褪染：
6.4.1 在清洗槽（de-stain washer）中，加入300 ml去離子水。
6.4.2 將呈色完全的膠片放入300ml去離子水中褪染，上下振盪10分鐘，清洗2次。
6.5 烘乾：
6.5.1 完全褪染後的膠片，移入55℃ 烘箱中烘乾60分鐘。
6.5.2 將膠片貼在預先標示之記錄紙上，並記錄反應過程中各項條件
結果判讀：
7.1
7.2
7.3
取出貼上的膠片之記錄紙（Form1），計算（依記錄紙上的刻度，肉眼目視）8個樣品的酵素呈色反應帶(band)所移動的位置(mm)，記錄於Form 2上。
利用Form 2的公式表格。比對已知Standard / Control的位移比例，計算待測樣品的正確位移。
在Form 3表中，將各個樣品所分析的4種同功酵素的移動位移±2mm之數值，在下方種源分析總表中圈選出來，4種同功酵素位移的交集，即為該樣品可能的種源。
(from Innovative chemistry : Authentikit system)