GFP plus

Projekt-Beschreibung

GFP+ führen wir als interdisziplinäres Praktikum zur Gentechnik bzw. zu diversen biochemischen Methoden durch (Es ist kein PBL-Projekt und dient ebenfalls nicht zur Vorbereitung auf die Maturaarbeit, wie unsere anderen Projekte).

Als Grundlage für dieses Praktikum diente die Genspirale vom Schullabor der Novartis und das pGLO-Kit von BIO-RAD. Die Zusammenführung dieser beiden Praktika wurde erstmals am Chemie-Zentralkurs 2009 vorgestellt. Danach wurde das Praktikum kontinuierlich ausgebaut und verbessert.

BIO-RAD bietet unter dem Label Life Science Education diverse Kits zu biochemischen bzw. gentechnischen Methoden an. Die beiden Kits pGLO Bacterial Transformation Kit, sowie Green Fluorescent Protein Chromatography Kit wurden an unserer Schule schon mehrfach erfolgreich durchgeführt. Auf der Basis dieser beiden Kits haben wir eine Praktikum entwickelt, welches weitere Standard-Methoden mit einbezieht und auf GFP anwendet.

Wir danken Frau Syndi Schatte (BIO-RAD, Lifescience Education / Inside Sales) und Bio-Rad für die Unterstützung in diversen Fällen bei der Entwicklung dieses Projektes!

Fachliche Inhalte

• Exp. 1: Transformation von E. coli mit dem pGLO-Plasmid (pGLO Bacterial Transformation Kit), inkl. Expression von GFP auf Medium mit Arabinose und Glucose

• Exp. 2: Isolation von pGLO aus der Flüssigkultur transformierter E. coli durch Minipräp (Quantum Prep Plasmid Miniprep Kit)

• Exp. 3: Restriktionsverdau von pGLO mit EcoRI, Hind III, Pst I und BamHI (Restriktion Digestion and Analysis of Lambda DNA Kit)

• Exp. 4: Gelelektrophorese der verdauten DNA

• Exp. 5: Lyse der transformierten E. coli und Reinigung des GFP in Säulenchromatografie (Green Fluorescent Protein Chromatography Kit)

• Exp. 6: Native PAGE der lysierten E. coli

• Exp. 7: SDS-PAGE der lysierten E. coli, sowie des in der Säulenchromatografie gereinigten GFP

• Exp. 8: Western Blot von GFP aus dem SDS-PAGE

Literatur

Roy H. Mosher: Using pGLO to Demonstrate the Effects of Catabolite Repression on Gene Expression in Escherichia coli (Seite 17)

Einblicke

Website einer Gruppe.

Organisatorisches

Zeitpunkt des Projektes

Prima, erstes oder zweites Semester

Zeitlicher Aufwand

22 Lektionen