Zmyslom GNG je vytvárať glukózu de novo z nesacharidových substrátov v čase hladovania (v postabsorbčnom období) pre potreby tkanív, ktoré sú na stálej dodávke glukózy závislé (hlavne erytrocyty (jediný zdroj energie pre ich anaeróbny metabolizmus) a CNS (hlavný a nevyhnutný zdroj energie)).
GNG využíva väčšinu enzýmov glykolýzy (v opačnom poradí).
V glykolýze sú 3 reakcie nevratné, v GNG sú preto 4 enzýmy, ktoré tieto reakcie obchádzajú, a tieto reakcie sú taktiež nevratné.
Na obrázku sú znázornené reakcie glukoneogenézy, prípadne reakcie vedúce ku glukoneogenéze (prázdne šípky) a reakcie glykolýzy (čierne šípky). Väčšinu reakcií má GNG spoločných s glykolýzou, avšak práve tie, ktoré nie sú spoločné, sú katalyzované regulačnými enzýmami.