Experimente

Experimentelles Vorgehen

Die Website soll einen Überblick über die durchgeführten Experimente geben, in welchen das GFP-Protein durch Bakterien gewonnen und analysiert wird.

Als Grundlage für die Experimente diente die Anleitung von Dr. Thomas Hari und Dr. Daniel Brunner sowie Kits zu biochemischen bzw. gentechnischen Methoden von BIO-RAD:

• Experiment 1: Transformation von E. coli mit pGLO-Plasmid (pGLO Bacterial Transformation Kit) inkl. Expression von GFP auf Medium mit Arabinose und Glucose.

• Experiment 2: Isolation von GFP aus Flüssigkultur transformierter E. coli (Quantum Prep Plasmid Miniprep Kit).

• Experiment 3: Restriktionsverdau durch versch. Restriktionsenzyme (Restriktion Digestion and Analysis of Lambda DNA Kit).

• Experiment 4: Gelelektrophorese der verdauten DNA.

• Experiment 5: Lyse der transformierten E. coli und Reinigung des GFP in Säulenchromatografie (Green Fluorescent Protein Chromatography Kit).

• Experiment 6: Native PAGE der lysierten E. coli.

• Experiment 7: SDS-PAGE der lysierten E. coli sowie des gereinigten GFP aus der Säulenchromatographie.

Übersicht Ablauf der Experimente