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Tinción de May-Grünwald-Giemsa
Grupo 1
Créditos: Belén Shi Asensio, Lucía Campos, Juana Galán, Laura Jiménez y Concepción Moreno.
Docente: Mercedes Pumariño Almoril
1.- Introducción
La tinción de May Grünwald-Giemsa, con su mezcla de colorantes ácidos y básicos (tipo Romanowsky), mejora el contraste al incluir una segunda tinción con Giemsa. Además, la inclusión de metanol en su fórmula permite la fijación de la extensión a la vez que su tinción.
2.- Objetivos
Los objetivos de esta práctica son los siguientes:
Realizar correctamente una extensión sanguínea
Aprender a ejecutar de forma correcta la tinción May Grünwald-Giemsa
Mejorar las habilidades a la hora de usar el microscopio
Proceder de forma ordenada y limpia
3.- Materiales
Portaobjetos y portaobjetos biselado
Lancetas
Capilares microhematocrito con heparina
Cristalizador o batea para recogida de colorantes
Puente de tinción
Pipeta Pasteur
Frasco lavador
EPI necesarios (guantes y bata)
Colorante de Giemsa
Colorante de May Grünwald
Solución tampón pH 7,2
Aceite de inmersión
Microscopio óptico
Muestra de sangre anticoagulada con EDTA
4.- Modus operandi
El primer paso para la realización de la práctica sería reunir todos los materiales: pipetas Pasteur, sangre anticoagulada, portaobjetos, colorantes May Grünwald y Giemsa, capilares sin anticoagulante, cristalizador, puente de tinción y frasco lavador con agua destilada. Todo el procedimiento debe realizarse sobre papel de filtro en condiciones asépticas y con el uso de los EPI necesarios (bata y guantes).
Tras reunir todos los materiales se procederá a realizar una extensión sanguínea. Para ello se realizarán los siguientes pasos:
1.- Abrir el tubo de sangre anticoagulada y rellenar un capilar con dicha sangre. Cerrar el tubo.
2.- Depositar una gota de sangre con el capilar sobre un portaobjetos limpio, deberá situarse en la parte más cercana al biselado.
3.- Con el filo sin biselar del portaobjetos extensor, se entra en contacto con la gota del portaobjetos soporte. Por capilaridad la sangre deberá extenderse sobre todo el borde del portaobjetos extensor.
4.- Con un movimiento rápido y firme desplazamos el portaobjetos extensor sobre el soporte, realizando así la extensión.
Una vez hecha la extensión se deja reposar al aire unos segundos para que se seque.
Tras este paso se procede a realizar la tinción en sí.
El primer paso sería colocar el puente de tinción sobre el cristalizador y cubrir el fondo de este último con un poco de agua, no es necesario que sea destilada, para que los colorantes no se fijen al fondo y se tiña de forma permanente.
Sobre el puente de tinción se coloca el portaobjetos con la extensión previamente hecha y con una pipeta Pasteur se cubre con colorante May Grünwald. Se deja reposar durante 2-3 minutos y se decanta, se lava con agua destilada con ayuda del frasco lavador.
Con el portaobjetos en posición horizontal sobre el puente de tinción, se cubre completamente de agua destilada y se deja reposar durante 1 min.
Pasado este tiempo con una pipeta Pasteur, sin decantar el agua, depositamos entre 12-14 gotas del colorante Giemsa. Para que el colorante se diluya por toda el agua sobre el portaobjetos, se sopla ligeramente un poco de aire con la ayuda de una pipeta Pasteur.
Se deja reposar durante 15 minutos, tras este tiempo se decanta el líquido sobre el portaobjetos y se lava con abundante agua destilada.
Tras haber realizado todos los pasos anteriores, el último sería dejar secar al aire y la muestra estaría lista para ser observada al microscopio.
5.- Resultados
El resultado obtenido fue una extensión sanguínea con tinción May Grünwald-Giemsa en la que se podía observar lo siguiente:
En esta fotografía se puede observar un eosinófilo con el núcleo bilobulado en forma de
gafas.
Aquí se pueden observar alguna plaqueta teñida de color rosado.
En la siguiente foto podemos ver un leucocito con el núcleo en anillo propio de síndromes mielodisplásicos y mieloproliferativos.
Aquí se pueden ver bastantes hematíes espiculados y una plaqueta en el centro.
Aquí podemos ver un monocito, se caracteriza por las vacuolas que se aprecian como manchas blancas sobre el núcleo y sobre su tamaño bastante mayor al de otras células.
5.- Conclusiones
La práctica se realizó de forma correcta y ordenada, pero surgieron algunas complicaciones en algunos pasos, sobre todo a la hora de visualizar la muestra al microscopio. Uno de los inconvenientes fue que no se observaron plaquetas a penas, había una cantidad muy pequeña.
Otro inconveniente fue la calidad de los microscopios, ya que no nos dejaba apreciar de forma clara los distintos elementos de la extensión, a pesar de eso pudimos observar algunas estructuras interesantes ya expuestas en el punto anterior.
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