AMOSTRAGENS NÃO-INVASIVAS

     Neste estudo a reavaliação das espécies de mamíferos consideradas localmente extintas (Pontes et al. 2016) será realizado identificando as espécies através de dois tipos de amostras não-invasivas: fezes e DNA de amostras mistas (metabarcoding). Para esse último caso, esse projeto pretende desenvolver um protocolo inédito de identificação de vertebrados da comunidade por meio da extração do DNA de pools de amostras de sangue de mosquitos hematófagos.

     As coletas das amostras de fezes serão realizadas percorrendo trilhas e estradas dentro do CEP, durante os levantamentos de avifauna e mastofauna. Em cada ponto de coleta serão registradas as coordenadas utilizando um GPS e tomada uma fotografia da amostra para futuro conhecimento da morfologia das fezes das espécies coletadas. As amostras serão armazenadas em tubo de polipropileno com etanol absoluto e em freezer –20ºC.

     A extração das amostras de fezes será realizada utilizando um kit comercial específico para esse tipo de amostras e a identificação molecular do material extraído será realizada amplificando diferentes genes do DNA mitocondrial, utilizando primers já padronizados no Laboratório de Biodiversidade Molecular e Conservação (Ramalho et al. 2014; Miotto et al. 2011; 2014). Os produtos de PCR (Polymerase Chain Reaction) serão sequenciados em equipamento automático.

     A amostragem dos mosquitos será realizada utilizando três tipos diferentes de armadilhas para capturar os adultos: uma de sangue para as fêmeas (Reiter 1987), uma de dióxido de carbono também para fêmeas e uma de luz para ambos sexos (Thongsripong et al. 2013). Os mosquitos coletados serão anestesiados utilizando CO2 e separados por morfoespécie, sexo, estado de alimentação, para em seguida serem armazenados em etanol 95%.

     O DNA do mosquito e do sangue serão extraídos utilizando kits comerciais para posteriores análises de metabarcoding. A plataforma Illumina de sequenciamento em larga escala será utilizada para identificar as potenciais espécies de vertebrados que tenham deixado vestígios celulares no sangue dos mosquitos hematófagos. As sequências obtidas por ambos os procedimentos não-invasivos serão comparadas com sequências obtidas previamente pelo grupo de pesquisa e com sequências disponíveis em distintos bancos de dados .

     Responsável: Pedro Galetti.