Fundamento

En el manejo de muestras contaminadas o cultivos mixtos en los que se encuentran diversos microorganismos, el primer paso para proceder a su estudio es el aislamiento, es decir la separación de cada uno de los posibles integrantes microbianos de la muestra.

Existen diversos métodos para conseguir esta separación, la mayoría de ellos basados en la inmovilización de las células microbianas en la superficie de los medios de cultivo sólidos. Al depositar una célula bacteriana o una levadura en un punto del medio de cultivo, ésta quedará inmovilizada en ese punto y en él se reproducirá por absorción de los nutrientes del medio. Las nuevas células generadas permanecerán igualmente inmóviles y tras sucesivas generaciones conformarán lo que denominamos una "colonia" que no es más que un montón de células derivadas de una sola célula madre inicial, es decir, un clon de la bacteria o levadura depositada al sembrar. Esta colonia es visible al ojo humano y presenta diferentes características según el microorganismo que la genera. Esto nos permite distinguir las diferentes poblaciones microbianas que se encuentran en la muestra sembrada y separarlas transfiriendo una colonia de cada tipo a un nuevo medio de cultivo estéril, a estos cultivos los consideraremos "puros" por poseer un sólo tipo de microorganismo. (El fundamento es válido teniendo en cuenta sólo microorganismos cultivables).

Objetivos

1. Distinguir los conceptos de cultivo puro y cultivo mixto.

2. Aplicar técnicas de aislamiento para la localización de microorganismos concretos en muestras contaminadas o con flora mixta.

3. Aplicar las técnicas del agotamiento y las estrías escocesas como las más habituales en aislamiento de microorganismos cultivables.

4. Observar la influencia de la temperatura sobre el desarrollo de los microorganismos.

Realización práctica

Técnicas de aislamiento. Se realiza un aislamiento de los microorganismos presentes en un cultivo mixto en caldo ordinario, sobre agar nutritivo. Se siembran dos placas de agar nutritivo, una mediante la técnica del agotamiento de asa y otra mediante la de estrías escocesas y en cuadrante.

Estas técnicas pretenden diluir la carga microbiana que se deposita sobre el medio de cultivo de forma que, en los últimos trazos de la siembra, haya tan pocas células que queden suficientemente separadas unas de otras y puedan desarrollar colonias independientes.

Técnica de aislamiento y recuento: el banco de diluciones. Se realizan una serie de diluciones seriadas a partir del cultivo mixto Con esta técnica conseguimos además de aislar colonias, obtener un recuento del número de bacterias que tenemos en el cultivo.

Esquema que representa el aislamiento de un microorganismo cultivable unicelular (dibujos de José Mª Costa).