11. Análisis microbiológico del agua
Los alumnos analizarán es esta práctica una muestra de agua procedente de la playa, de un pozo, de un estanque, así como una muestra de agua potable.
A. Bacterias aerobias totales.
Para el recuento de aerobios totales, se sembrarán 0,1 ml en 2 placas con agar nutritivo y se incubarán a 22ºC y a 37ºC.
B. Coliformes totales, E.coli, enterococos, Clostridium perfringes y Pseudomonas.
Fracciones de 100 ml de cada muestra de agua se filtrarán a través de un filtro de membrana de 0,45 micras de tamaño de poro y se sembrará el filtro en placas conteniendo:
1. Agar McConkey para la determinación de bacterias coliformes totales (colonias rojas).
2. Agar Levine para el recuento de E. coli (colonias verde metálico).
3. Agar KAA para el recuento de enterococos (colonias rodeadas de halos negros).
4. Agar Perfringes para el recuento de Clostridium perfringes (colonias negras).
5. Agar Cetrimide para el recuento de Pseudomonas (colonias verdes)
6. Agar MSA para el recuento de Staphylococcus aureus (colonias amarillas)
La determinación de microorganismos en una muestra de agua mediante la técnica de filtración por membrana (ver video) se realiza en muchos laboratorios, ya que permite discriminar las aguas aptas y no aptas para el consumo desde el punto de vista bacteriológico de manera más rápida, económica y sencilla que mediante la utilización de la técnica del número más probable. Se puede utilizar en el análisis de aguas con bajos niveles de contaminación. Se filtra un volumen conocido de agua (p.e. 100 ml) a través de una membrana estéril de 0.45 mm. Esta membrana se coloca en una placa de medio selectivo (diferente según el tipo de microorganismo a detectar) y se incuba normalmente 24 hr. a 37ºC.
C. Hongos filamentosos y levaduras.
La determinación de hongos filamentosos y levaduras se realizará sembrando en medio Sabouraud con cloranfenicol, bien por la técnica de filtración (cuando se sospeche la presencia de un número reducido de hongos), o bien haciendo diluciones del homogeneizado y sembrando alícuotas de cada una de ellas (cuando se sospeche que existe un elevado número).