Objetivo:

Visualizar el producto de la PCR en un gel de agarosa sometido a un campo eléctrico.

Fundamento:

Los fragmentos de ADN amplificados están cargados negativamente por lo que al someterlos a un campo eléctrico (electroforesis en gel de agarosa), estos migrarán hacia el polo positivo en función del tamaño del fragmento. Cuanto menor es el fragmento de ADN más rápido avanzará por el gel de agarosa.

Realización de la práctica:

Para visualizar los fragmentos amplificados en la PCR utilizamos un gel de agarosa al 1,8% que contiene un colorante para el ADN. Cada mesa coloca una muestra del producto de PCR (10 µl) en uno de los pocillos del gel de agarosa, después de mezclarla con 2µ del tapón de carga que hace que el ADN no quede flotando y se salga del pocillo. Se reserva un pocillo para el marcador de tamaños moleculares que es la regla para medir el tamaño de los fragmentos que se corren.

Los fragmentos amplificados se verán como bandas que quedan a diferente altura según el tamaño de cada una. Se pueden utilizar diferentes colorante para visualizar el DNA. Este se intercala entre las bases y al iluminarlo con la longitud de onda adecuada se visualizan las bandas.