Coleta de solo para análise

A coleta de solo (0 - 10 cm) será realizada em agosto de 20xx, sendo este obtido de área de cultivo de soja cv. DonMario, em área de produção da localizada na Universidade Estadual de Goiás, Campus Sul, Unidade Universitária de Ipameri (17°42’55”S, 48°08’23’’W, 805m), Ipameri, Goiás, Brasil. O solo foi classificado como latossolo vermelho-amarelo, distrófico de textura média, conforme o Sistema Brasileiro de Classificação de Solos (SiBCS) EMBRAPA, com os seguintes atributos pH (água, CaCl e KCl) de 5,3; matéria orgânica e carbono de 20 e 11,60 g/dm3; P, K e Na de 10,1; 75,9 e 5,7 mg dm-3, respectivamente; Ca, Mg, Al e CTC efetiva de 2,3; 1,3; 0 e 2,6 cmol cdm3 respectivamente; CTC igual a 6,39 cmol cdm3 e saturação por base 59,31%. Não houve infestação do solo por nenhum fungo e nenhuma aplicação de produto biológico até o momento de coleta. 

Estimativa da densidade de inóculo de Trichoderma sp. e Fusarium oxysporum em solo

As amostras de solo contendo microbiota indígena serão acondicionadas em caixas acrílicas do tipo gerbox (11,0 x 11,0 cm) e submetidas à 24°C e fotoperíodo de 12h (4 gerbox/área), mantendo-se a umidade do solo constante em incubadoras do tipo BOD. Em seguida, amostras de 5g de solo serão removidas dos gerbox e diluídas em 45 ml de água destilada esterilizada (ADE) com auxílio de agitador vórtex. Alíquotas de 1 ml da suspensão do solo será pipetada para tubo de ensaio contendo 9 ml de água destilada, repetindo-se o procedimento até a obtenção da razão 1:100. Posteriormente, alíquotas de 0,5 ml serão plaqueadas em meio semi-seletivo TSM (Trichoderma selective medium) (0,12 g de KH2PO4; 0,26 g de MgSO4.7H2O; 0,26 g de KNO3; 1,0 g de CaCl2.2H2O; 1,0 g de Ca(NO3)2; 0,05 g de ácido cítirco; 1,0 mL de Igepal; 2,0 g de Sacarose; 18,0 g de ágar; 0,0025 g de Vinclozolin; 1000 mL de água destilada) e Komada (20,0 g de D-Galactose; 2,0 g de L-Asparagina; 1,0 g de KH2PO4; 0,5 g de KCl; 0,5 g de MgSO4.7H2O; 10 mg de Fe3Na EDTA; 18,0 g de ágar; 750 mg de PCNB; 1,0 g de Na2B4O7.10H2O; 1000 mL de água destilada) para Trichoderma sp. e F. oxyusporum, respectivamente. Um total de 20 repetições (placas de Petri) será empregado para cada área avaliada, sendo 5 placas/gerbox.

Trichoderma sp. e F. oxysporum serão identificados de acordo com a morfologia de colônia e caracteres micromorfológicos, e sua densidade populacional expressa em UFC/g (CARVALHO et al., 2015). A estimativa do número de propágulos de Trichoderma sp. e F. oxysorum por grama de solo será obtida pela fórmula: NP = NC x 90, sendo NP (número de propágulos por grama de solo) e NC (número médio de colônias por placa). 

Obtenção de isolados de Trichoderma sp. e Fusarium oxysporum a partir de amostras de solo

Isolamentos serão realizados a partir das colônias obtidas em placas submetidas a temperatura de 24°C do procedimento anterior. Para os isolamentos, micélio fúngico de colônias serão repicados para meio semi-seletivo TSM e Komada até a obtenção de isolados purificados de Trichoderma sp. e F. oxysporum, respectivamente. Réplicas dos isolados de fungos serão preservadas em água destilada (CASTELLANI, 1967) e depositados no Laboratório de Fitopatologia da Universidade Estadual de Goiás (UEG), Unidade Universitária de Ipameri, Goiás, Brasil.

Análises estatísticas

Os resultados serão submetidos ao teste de Kolmogorov-Smirnov para verificar a normalidade dos dados e, posteriormente, os resultados relativos ao número de propágulos (NP) de Trichoderma sp. e F. oxysporum em solo serão submetidos à análise de variância (ANOVA) e ao teste de Scott-Knott (P<0,05) para verificar se há diferença entre as áreas avaliadas. Todas as análises serão realizadas com auxílio do programa SISVAR 5.3 (FERREIRA, 2011).

Referências

CARVALHO, D.D.C., MELLO, S.C.M., MARTINS, I. LOBO JUNIOR, M.  Biological control of Fusarium wilt on common beans by in-furrow application of Trichoderma harzianum. Tropical Plant Pathology, 40, 375-381, 2015. https://doi.org/10.1007/s40858-015-0057-1

CASTELLANI, A. Maintenance and cultivation of common pathogenic fungi of man in sterile distilled water: further researches. The American journal of tropical medicine and hygiene, 70, 181-184, 1967.

FERREIRA, D.F. Sisvar: a computer statistical analysis system. Ciência e agrotecnologia, 35, 1039-1042, 2011. https://doi.org/10.1590/S1413-70542011000600001