Crescimento micelial a diferentes temperaturas

Para avaliação do crescimento micelial, os isolados fúngicos serão reativados em meio BDA e, em seguida, discos de micélio (7mm Ø), contendo micélio dos quatro isolados do fungo serão retirados de colônia com dez dias de crescimento e transferidos para o centro de placas de Petri (85mm Ø) contendo meio BDA. Em seguida, as placas serão mantidas em BOD nas temperaturas de 16ºC, 20ºC, 24ºC, 28ºC e 32ºC e fotoperíodo de 12h. O crescimento radial do micélio (cm) será avaliado aos 2, 4, 6, 8 e 10 dias após a repicagem, a partir da média de dois diâmetros diametralmente opostos. 

Produção de conídios a diferentes temperaturas

Após a última leitura do crescimento radial (10 dias) do experimento anterior, as placas serão aproveitadas para quantificação da produção de esporos pelos isolados fúngicos. Para tanto, um total de 10 mL de água destilada esterilizada (ADE) serão adicionados em cada placa de Petri, seguido da liberação dos esporos com alça de Drigalsky. Em seguida, os esporos serão recolhidos em Becker e filtrados em gaze esterilizada. As concentrações das suspensões obtidas serão mensuradas em câmara de Neubauer, realizando-se a contagem de esporos cinco vezes em cada placa (CARVALHO et al., 2008). O delineamento experimental será o inteiramente casualizado (DIC), com cinco repetições (placas) por cada isolado de fungo.

Análises estatísticas

Os resultados serão submetidos ao teste de Kolmogorov-Smirnov para verificar a normalidade dos dados e, posteriormente, os valores dos diâmetros das colônias (cm) (do 2º ao 10º dia) serão utilizados para se calcular a área ocupada pela colônia (a) do fungo (cm2), através da fórmula da circunferência (a = π * r2). Posteriormente, será calculada a área abaixo da curva de crescimento micelial (AACCM), a qual será calculada a partir dos valores de diâmetro das colônias (mm), através da fórmula: AACCM = Σ [(y1+y2/2) x (t2-t1)], onde: y1 e y2 são duas avaliações consecutivas realizadas nos tempos t1 e t2, respectivamente. Os valores da área ocupada pela colônia do fungo (ao 10º dia), AACCM e esporulação (ao 10º dia), serão submetidos à análise de variância (ANOVA) e a análise de regressão (P<0,05). Para as análises será empregado o software SISVAR 5.3 (FERREIRA, 2011). 

Referências

CARVALHO, D.D.C.; ALVES, E.; BATISTA, T.R.S.; CAMARGOS, R.B.; LOPES, E.A.G.L. Comparison of methodologies for conidia production by Alternaria alternata from citrus. Brazilian Journal of Microbiology, 39(4), 792-798, 2008. https://doi.org/10.1590/S1517-83822008000400036

FERREIRA, D.F. Sisvar: a computer statistical analysis system. Ciência e agrotecnologia, 35, 1039-1042, 2011. https://doi.org/10.1590/S1413-70542011000600001