Competência rizosférica

Para o ensaio de competência da rizosférica, as sementes serão tratadas com Trichoderma sp. (2 mL de suspensão a 2,5 x 108 conídios mL-1 por 100 g de sementes) e semeadas em caixas plásticas (30 x 40 cm), contendo areia lavada autoclavada. Além das cepas, haverá um tratamento composto por sementes não tratadas (controle negativo), semeadas em caixas com areia, sem Trichoderma. Um total de quatro caixas serão utilizadas por tratamento, sendo 50 sementes/caixa. Após a semeadura, uma suspensão de 100 mL de Trichoderma sp. a 5 x 107 conídios mL-1 será pulverizada em cada caixa. Aos 10 dias após o semeio (DAS), a emergência em areia será avaliada, e cinco plantas por caixa serão coletadas. As raízes das plantas coletadas serão lavadas, excisadas em dois segmentos (da coroa até os próximos 5 cm e dos 5 cm medianos até a ponta da raiz), usando um bisturi esterilizado. Posteriormente, as raízes obtidas de cada segmento serão cortadas (1 cm). Os fragmentos de cada tratamento serão separadamente acondicionados em placas de Petri esterilizadas, lacradas e levadas para uma sala de incubação escura a 22ºC por 48 horas, para secagem natural das raízes. Os fragmentos de raiz serão semeados em Trichoderma selective medium - TSM (0,12 g de KH2PO4, 0,26 g de MgSO4.7H2O, 0,26 g de KNO3, 1,0 g de CaCl2.2H2O, 1,0 g de Ca(NO3)2, 0,05 g de ácido cítrico, 1,0 mL de Igepal, 2,0 g de sacarose, 18,0 g de ágar, 0,0025 g de vinclozolina, 1.000 mL de água destilada) na quantidade de 10 fragmentos por placa de Petri (9 cm). Para cada isolado, 16 placas serão preparadas (8 placas/segmento), sendo duas placas para cada grupo de cinco plantas da mesma caixa. Após incubação por cinco dias em BOD a 25ºC e fotoperíodo de 12 h, a porcentagem de fragmentos colonizados por Trichoderma será estimada. O ensaio será realizado em delineamento em blocos casualizados (DBC).

Análises estatísticas

Os resultados serão submetidos ao teste de Kolmogorov-Smirnov para verificar a normalidade dos dados e, posteriormente, os dados relativos ao percentual de fragmentos colonizados serão submetidos à análise de variância (ANOVA) e ao teste de Scott-Knott (P<0,05), utilizando o software Sisvar (FERREIRA, 2008).

Referências

FERREIRA, D.F. Sisvar: a computer statistical analysis system. Ciência e agrotecnologia, 35, 1039-1042, 2011. https://doi.org/10.1590/S1413-70542011000600001