Daniel Diego Costa Carvalho

Basic Mycology

Germ tube

Avaliação da germinação de esporos de quatro isolados fúngicos submetidos aos regimes de luz e escuro

A germinação de esporos dos quatro isolados fúngicos será realizada utilizando placas de Petri descartáveis (60 mm Ø) contendo meio de cultura água-ágar (AA) e 100μL de suspensão de esporos, calibrada a 3,6 × 106 conídios mL−1 para cada isolado (MUNIZ et al., 2024). Em seguida, as placas serão transferidas para câmara de crescimento do tipo BOD na temperatura de 24°C sob duas condições de iluminação (luz constante e escuro constante), usando lâmpadas fluorescentes 20 W-75RS (Philips®). As placas serão posicionadas sob microscópio óptico DM500 com software LAS EZ 2.0 (40×) (Leica®) para avaliar a germinação de esporos medindo o comprimento do tubo germinativo (base inicial da emissão até a extremidade terminal do tubo de germinação) de cinco esporos por placa (ou cinco esporos/suspensão em 5 leituras) a cada hora durante cinco horas. A porcentagem de germinação de conídios (PG) sob cada condição de iluminação será calculada usando a equação PG = (número de conídios germinados / número total de conídios analisados) × 100. O experimento será conduzido em delineamento inteiramente casualizado, com arranjo fatorial 4 × 2 (quatro isolados e dois regimes de luz) e quatro placas de Petri para cada isolado avaliado.

Análises estatísticas

Os resultados serão submetidos ao teste de Kolmogorov-Smirnov para verificar a normalidade dos dados e, posteriormente, os resultados relativos ao comprimento do tubo germinativo (µm) dos conídios serão submetidos à análise de regressão para obtenção de modelos significativos capazes de viabilizar a previsão de germinação ao longo de 5h para cada isolado, quando submetidos a luz constante e escuro constante. Além disso, os dados relativos ao comprimento do tubo germinativo (5h) e ao percentual de germinação (PG) serão submetidos à análise de variância (ANOVA) e ao teste de Scott-Knott (P<0,05) para verificar se há diferença entre os isolados e entre os regimes de luz. Todas as análises serão realizadas com auxílio do programa SISVAR 5.3 (FERREIRA, 2011).

Referências

FERREIRA, D.F. Sisvar: a computer statistical analysis system. Ciência e agrotecnologia, 35, 1039-1042, 2011. https://doi.org/10.1590/S1413-70542011000600001

MUNIZ, P.H.P.C.; OLIVEIRA, T.A.S.; DUARTE, E.A.A.; RODRIGUES, F.; CARVALHO, D.D.C. Characterization of Bipolaris bicolor germination: effects of a physical factor on fungal adaptability. Brazilian Journal of Microbiology, 55, 3521-3528, 2024. https://doi.org/10.1007/s42770-024-01520-w

Avaliação da germinação de esporos de isolado fúngico submetido a diferentes temperaturas e aos regimes de luz e escuro

A germinação de esporos dos um isolado fúngico será realizada utilizando placas de Petri descartáveis (60 mm Ø) contendo meio de cultura água-ágar (AA) e 100μL de suspensão de esporos, calibrada a 3,6 × 106 conídios mL−1 para cada regime de temperatura (MUNIZ et al., 2024). Em seguida, as placas serão transferidas para câmara de crescimento do tipo BOD nas temperaturas de 16, 20, 24, 28 e 32°C sob duas condições de iluminação (luz constante e escuro constante), usando lâmpadas fluorescentes 20 W-75RS (Philips®). As placas serão posicionadas sob microscópio óptico DM500 com software LAS EZ 2.0 (40×) (Leica®) para avaliar a germinação de esporos medindo o comprimento do tubo germinativo (base inicial da emissão até a extremidade terminal do tubo de germinação) de cinco esporos por placa (ou cinco esporos/suspensão em 5 leituras) a cada hora durante cinco horas. A porcentagem de germinação de conídios (PG) sob cada condição de iluminação será calculada usando a equação PG = (número de conídios germinados / número total de conídios analisados) × 100. O experimento será conduzido em delineamento inteiramente casualizado, com arranjo fatorial 6 × 2 (seis temperaturas e dois regimes de luz) e quatro placas de Petri para cada temperatura avaliada.

Análises estatísticas

Os resultados serão submetidos ao teste de Kolmogorov-Smirnov para verificar a normalidade dos dados e, posteriormente, os resultados relativos ao comprimento do tubo germinativo (µm) dos conídios serão submetidos à análise de regressão para obtenção de (1) modelos significativos capazes de viabilizar a previsão de germinação ao longo de 5h para cada temperatura, quando submetidos a luz constante e escuro constante e (2) modelos de regressão para predição da germinação final (5h) ao longo do gradiente de temperatura, quando submetidos a luz constante e escuro constante. Além disso, os dados relativos ao comprimento do tubo germinativo (5h) e ao percentual de germinação (PG) serão submetidos à análise de variância (ANOVA) e ao teste de Scott-Knott (P<0,05) para verificar se há diferença entre as temperaturas e entre os regimes de luz. Todas as análises serão realizadas com auxílio do programa SISVAR 5.3 (FERREIRA, 2011).

Referências

FERREIRA, D.F. Sisvar: a computer statistical analysis system. Ciência e agrotecnologia, 35, 1039-1042, 2011. https://doi.org/10.1590/S1413-70542011000600001

References link:

https://doi.org/10.1007/s42770-024-01520-w

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