USUI Lab Univ. Tsukuba - Buffer

<Buffer>

CBB staing

CBB solution

Coomassie brilliant blue 1 g
25% Iso-propylalcohol 250 ml
10%Acetic acid 100 ml/ L

※Autoclaveしない！

x10 PBS

NaCl 80 g
KCl 2 g
Na2HPO4 11.5 g
KH2PO4 2 g/ L

※pHを調整しなくても、既にpH7.4になっている

RB

100 mM MES 21.3 g

0.5 mM MgCl2･6H 2O 101.6 mg

1 mM EGTA 380.4 mg/ L

SDS-PAGE

30% Acrylamide

29.2% Acrylamide 29.2 g
0.8% Bis 0.8 g/100 ml

※Autoclaveしない！

x10 Running buffer

250 mM Tris base 30.3 g
1920 mM Glycine 144.1 g
1% SDS 10 g/ L

※Autoclaveしない！

Separating gel (pH8.8)

1.5 M Tris base 90.9 g
0.4 % SDS 2 g/ 500 ml

※Autoclaveしない！

※HClでpH8.8に調整

Stacking gel (pH6.8)

0.5 M Tris base 30.3 g
0.4 % SDS 2 g/ 500 ml

※Autoclaveしない！

※HClでpH6.8に調整

x4 Sample buffer (pH6.8)

250 mM Tris base 3 g
8 % SDS 8 g
40 % Glycerol 40 ml
20 % 2ME 20 ml/ 100 ml

※Autoclaveしない！

※4℃保存

Silver staining

Solution A

50% MeOH 250 ml
10% Acetic acid 50 ml/ 500 ml

Solution B

5% MeOH 25 ml
7% Acetic acid 35 ml
1% Glutaladehyde 5 ml/ 500 ml

x10 Silver mix

(1) NaOH (solid) 0.75 g/ NH 4OH 14 ml

(2) Silver Nitrate 8 g/ 100 ml

※使用時に(1)、(2)を等量加えて10倍希釈

※(1)は長期保存できないので注意！

Developer

0.005% Citrate 25 mg
0.019% Folmalin 95 mg/ 500 ml

x50 TAE (pH8.5)

2 M Tris base 242.0 g
5.71% Acetic acid 57.1 ml
50 mM EDTA・2Na 18.6 g/ L

※Autoclaveしない！

※NaOHでpH8.5に調整

TB

10 mM PIPES 0.60 g
15 mM CaCl2 ・2H2O 0.44 g
250 mM KCl 3.72 g/ 190 ml

※KOHでpH6.7に調整

55 mM MnCl2・4H2O 2.18 g/ 200 ml

(MnCl2・2H2O1.78 g)

x10 TBS (pH7.4)

250 mM Tris base 30 g
1.5 M NaCl 88 g/ L

※Autoclave後、x1に希釈してTween-20を0.1%加える。

TE (pH8.0)

10 mM Tris base 121 mg
1 mM EDTA・2Na 37.2 mg/ 100 ml

Tarnsfer buffer (pH8.3)

25 mM Tris base 9 g
192 mM Glycine 43.2 g
20 % MeOH 600 ml
0.1 % SDS 3 g/ 3 L

※Autoclaveしない！

※4℃保存

x25 Trypsin

1.25% Trypsin 1.25 g
0.5% EDTA 0.5 g/ PBS 100 ml

※4℃で攪拌しながらよく溶かす。o/n

→5,000 rpm, 5 min遠心した上清をfiltration

→-20℃保存

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