マニュアル
CBB staing
PBS
RB
SDS-PAGE
Silver staing
TAE
TB
TBS
TE
Transfer buffer
Trypsin
LB
SC-X
Super broth
YPDA
YT
＜Buffer＞
CBB staing
CBB solution
Coomassie brilliant blue 1 g
25% Iso-propylalcohol 250 ml
10%Acetic acid 100 ml/ L
※Autoclaveしない！
x10 PBS
NaCl 80 g
KCl 2 g
Na2HPO4 11.5 g (無水の場合）
KH2PO4 2 g/ L
※pHを調整しなくても、既にpH7.4になっている
RB
100 mM MES 21.3 g
0.5 mM MgCl2･6H 2O 101.6 mg
1 mM EGTA 380.4 mg/ L
SDS-PAGE
30% Acrylamide
29.2% Acrylamide 29.2 g
0.8% Bis 0.8 g/100 ml
※Autoclaveしない！
x10 Running buffer
250 mM Tris base 30.3 g
1920 mM Glycine 144.1 g
1% SDS 10 g/ L
※Autoclaveしない！
Separating gel (pH8.8)
1.5 M Tris base 90.9 g
0.4 % SDS 2 g/ 500 ml
※Autoclaveしない！
※HClでpH8.8に調整
Stacking gel (pH6.8)
0.5 M Tris base 30.3 g
0.4 % SDS 2 g/ 500 ml
※Autoclaveしない！
※HClでpH6.8に調整
x4 Sample buffer (pH6.8)
250 mM Tris base 3 g
8 % SDS 8 g
40 % Glycerol 40 ml （比重1.261g/mlなので50.44g)
20 % 2ME 20 ml/ 100 ml
※Autoclaveしない！
※4℃保存
Silver staining
Solution A
50% MeOH 250 ml
10% Acetic acid 50 ml/ 500 ml
Solution B
5% MeOH 25 ml
7% Acetic acid 35 ml
1% Glutaladehyde 5 ml/ 500 ml
x10 Silver mix
(1) NaOH (solid) 0.75 g/ NH 4OH 14 ml
(2) Silver Nitrate 8 g/ 100 ml
※使用時に(1)、(2)を等量加えて10倍希釈
※(1)は長期保存できないので注意！
Developer
0.005% Citrate 25 mg
0.019% Folmalin 95 mg/ 500 ml
x50 TAE (pH8.5)
2 M Tris base 242.0 g (Tris-HClではない）
5.71% Acetic acid 57.1 ml
50 mM EDTA・2Na 18.6 g/ L (EDTAの場合は14.6g/L)
※Autoclaveしない！
※NaOHでpH8.5に調整
TB
10 mM PIPES 0.60 g
15 mM CaCl2 ・2H2O 0.44 g
250 mM KCl 3.72 g/ 190 ml
※KOHでpH6.7に調整
55 mM MnCl2・4H2O 2.18 g/ 200 ml
(MnCl2・2H2O1.78 g)
x10 TBS (pH7.4)
250 mM Tris base 30 g
1.5 M NaCl 88 g/ L
※Autoclave後、x1に希釈してTween-20を0.1%加える。
TE (pH8.0)
10 mM Tris base 121 mg
1 mM EDTA・2Na 37.2 mg/ 100 ml
Tarnsfer buffer (pH8.3)
25 mM Tris base 9 g
192 mM Glycine 43.2 g
20 % MeOH 600 ml
0.1 % SDS 3 g/ 3 L
※Autoclaveしない！
※4℃保存
x25 Trypsin
1.25% Trypsin 1.25 g
0.5% EDTA 0.5 g/ PBS 100 ml を先に作りNaOHでpHを調整後にTrypsinを入れる
※4℃で攪拌しながらよく溶かす。o/n（新しいTrypsinはすぐ解けるのでO/N＆遠心必要なし）
→5,000 rpm, 5 min遠心した上清をfiltration
→-20℃保存