Paso 1. Preparación de Placas LB con Antibiótico
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En esta caso se utilizara medio LB sólido (medio Luria-Bertani con agar) el cual contiene los siguientes componentes:
Figura 1. Ilustración de los componentes del medio LB. Fuente [Original]
Importante. Las placas de LB sólido se preparan en una zona con condiciones de alta esterilidad para evitar contaminación por otras bacterias del medio.
Materiales
Equipo:
Autoclave.
Lámpara de alcohol o mechero.
Instrumentos:
Cajas de Petri de 35 mm.
Guante para altas temperaturas.
Reactivos:
Antibiótico para selección.
Procedimiento:
1.Esterilización.
El medio se esteriliza en una autoclave durante 20 minutos, a 120 °C en 20 psi (libras por pulgadas cuadradas).
2. Adición de antibiótico.
Una vez que el medio llegue a temperatura ambiente (25 °C), pero antes de solidificarse, se adiciona el antibiótico adecuado que se determina por la secuencia de resistencia que se marca en el plásmido seleccionado.
Consideración: Se anexa la siguiente tabla de antibióticos con las concentraciones utilizadas.
Tabla 1. Antibióticos comunes usados como marcadores de selección para bacterias.
3. Depósito en cajas Petri.
3. Depósito en cajas Petri.
La mezcla del medio LB con el antibiótico se vierte en cajas de Petri que se dejan abiertas en una zona aséptica hasta que se solidifiquen.
Consideración: Las cajas preparadas pueden durar aproximadamente tres meses. Si no se usan inmediatamente, se pueden guardar a 4 °C boca abajo. Las cajas de Petri se etiquetan en la base, en este momento ya están listas para depositar la mezcla de transformación que a continuación se detalla.
4. Rotulación en la base de la caja
4. Rotulación en la base de la caja
Una vez que se han solidificado, las placas se etiquetan en la base.
Resumen Gráfico del Procedimiento
Referencias:
Making LB Agar Plates. Consultado el 30 de octubre 2024 en: https://www.addgene.org/protocols/pouring-lb-agar-plates/
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