Evaluación de la Motilidad Espermática por el Sistema CASA
Evaluación de la Motilidad Espermática por el Sistema CASA
La motilidad espermática es un parámetro fisiológico fundamental para el éxito de la fertilización. Un análisis completo de la calidad del semen requiere evaluar la motilidad, lo que puede hacerse de manera subjetiva o mediante un análisis sistematizado. Dado que la evaluación subjetiva puede verse afectada por variaciones en las habilidades, el entrenamiento y la experiencia de los analistas [1, 2], el análisis de espermatozoides asistido por computadora (CASA, por sus siglas en inglés: Computer-Assisted Sperm Analysis) proporciona mediciones más objetivas. Este método emplea un software especializado que cuantifica múltiples parámetros de motilidad en términos porcentuales (Tabla 2), lo que facilita el análisis estadístico posterior [2].
El análisis por CASA rastrea (track) el desplazamiento de los espermatozoides, esto lo realiza a través del seguimiento del movimiento de la cabeza, lo que permite obtener imágenes claras durante las evaluaciones [3]. Adicionalmente el sistema CASA permite determinar otras características relevantes para la evaluación de los espermatozoides como: la concentración celular, la morfología y la integridad del ADN.
Componentes del CASA
El CASA está compuesto (Figura 1), por una videocámara, una tarjeta para la captura de los fotogramas que componen a los vídeos y una computadora con un software informático para identificar y seguir a los espermatozoides y realizar los cálculos correspondientes [4].
¿Cómo funciona el CASA?
Inicialmente el sistema envía una imagen del campo del microscopio desde la cámara, modificándose a una imágen digital. Para que la cámara detecte a los espermatozoides en movimiento, es necesario que la imagen se obtenga en un campo oscuro o de alto contraste de fase negativa, lo cual permite contrastar las cabezas de los espermatozoides en tono blanco sobre un fondo oscuro.
Posteriormente se digitaliza la imágen de cada cabeza con la computadora, la cual determina el número de elementos de imágen (píxeles) que cubren la cabeza del espermatozoide.
Una vez identificada la cabeza del espermatozoide, se calcula su posición en coordenadas (x, y) del plano de cada campo. Este punto se determina utilizando el centro de la cabeza del espermatozoide como marca de referencia.
Después de que todas las cabezas de los espermas están en un solo campo y han sido identificadas, se registran los datos informáticos y se analiza el siguiente campo. Las imágenes de las cabezas de los espermatozoides son rastreadas por la computadora, la cual busca una imagen consecutiva de un espermatozoide dentro de una zona de probabilidad, dentro de un radio en particular, el cual está determinado por la distancia máxima que se espera recorra en un periodo de tiempo [3].
Materiales
Equipo
Microscopio de contraste de fases con platina calefaccionada
Cámara acoplada al microscopio
Computadora con software especializado
Termoblock
Termoplatina
Instrumentos
Cámara para el registro de trayectorias
Micropipetas de volúmenes variables
Puntas para micropipetas
Procedimiento:
Previo a la evaluación es fundamental mantener las muestras a una temperatura constante entre 37 a 39 °C, en un termoblock.
Posteriormente se deberán colocar 10 microlitros de la muestra en la cámara de registro.
La cámara se posiciona sobre la platina del microscopio y se ajusta a la observación de diferentes campos donde se encuentran los espermatozoides en movimiento, para posteriormente correr el análisis con el software especializado (Figura 1).
Figura 1. Elementos del sistema CASA. Ejemplo de los parámetros evaluados y la clasificación obtenida por el software. Fuente [Original].
Resumen gráfico del procedimiento
Referencias:
Verstegen, J, Iguer-Ouada M & Onclin, K. (2002). Computer assisted semen analyzers in andrology research and veterinary practice. Theriogenology 57, 149–179. https://doi:10.1016/S0093-691X(01)00664-1
Yeste Marc, Bonet Sergi, Rodríıguez-Gil Joan E & Rivera Del A lamo Maria M. (2018). Evaluation of sperm motility with CASA-Mot: which factors may influence our measurements?. Reproduction, Fertility and Development, https://doi.org/10.1071/RD17475
Mortimer, S. T. (2000). CASA—Practical aspects. Andrology, 21(4), 515-524. https://doi.org/10.1002/j.1939-4640.2000.tb02116.x