• 研究動機

欲了解如何讓細菌在適當培養基下生長，並使細菌藉由純化分離而容易觀察。

• 實驗原理

(一)接種細菌方法

細菌的接種方式，因不同培養機種類而相異。若是接種至固體培養基，可用劃線法與塗抹法。若是接種至半固體培養基，則可用穿刺法。當我們進行接種時，需在無菌台操作，以避免有雜菌汙染。(本次實驗因人數多，而在酒精燈旁操作，利用燃燒帶上去的熱氣，使空氣中的物質被往上帶而不落下，減少實驗汙染)

(二)培養基

培養基有plate, broth, stant, deep四種，不同培養基適用不同細菌培養。

(三)細菌純化

1. 分區劃線法：利用劃線法，將細菌菌落快速稀釋分散於營養plate上
2. 稀釋塗抹法：先將混合菌液稀釋，再用三角玻棒均勻塗抹於營養plate上
3. 倒皿法：將稀釋菌液與(加熱)溶解的培養基混合，直接倒在plate上

• 實驗步驟

(一)細菌之接種法

1. 菌落懸浮法：

#1 在tube上寫上日期、組名，及培養之細菌名稱(此實驗為E.coli)

#2 利用接種環，將平板培養基上E.coli之單一菌落取出，置於LB培養液中(須將菌落完全打入)

#3 混合均勻

#4 放入37°C震盪培養箱內培養

#5 (隔天)觀察細菌生長情形

2. 塗抹法：(30-300 CFU/plate適當)

#1 在plate上寫上日期、組名，及培養之細菌名稱(此實驗為E.coli)

#2 以Pipetman吸取0.1ml之E.coli稀釋菌液，並滴於LB plate上

#3 取三角玻棒消毒後(＊消毒：將它置於95%酒精燒杯，取出瀝乾後，過火使酒精燃盡；可利用冷凝無菌水或LB邊緣處稍作冷卻)，將菌液均勻塗抹於LB plate上

#4 將菌盤倒放，放入37°C培養箱內培養

#5 (隔天)觀察細菌生長情形

(二)細菌分離純化與分區劃線法

1. 接種環消毒後(＊消毒：將它過火燒紅；可利用冷凝無菌水或LB邊緣處稍作冷卻)，取E.coli單一菌落於LB plate上劃開👉「第一區」

2. 再次消毒接種環後，從第一區內沾取一條少量菌落往外劃開👉「第二區」

3. 依上述方法(2.)，再往外劃開👉「第三區」，第三區線條盡量拉開，不太過密集

4.將菌盤倒放，放入37°C培養箱內培養

5. (隔天)觀察細菌生長情形

https://sites.google.com/site/2016nthusummercamp13/home/wei-sheng-wu-xue-zhuan-ti/shi-yan-jie-guo

• 實驗心得

這堂實驗課，學習到分離及純化細菌的作法，除了在對微生物的知識有更一步的了解外，也對於實驗操作有新的認識。自己在學校做無菌處理是在無菌台上操作，之前就有「那我們如何不藉由無菌台就操作實驗」的想法；而在這堂課，也學習到了新的方法，也就是酒精燃燒帶動空氣往上。頗有收穫！