就細胞化學結構分析而言,革蘭氏陽性細菌的細胞壁有一層較厚的胜肽聚醣(peptidoglycan),所含脂質(lipid)較少,染色步驟中以乙醇脫色處理時,細胞必會形成推水現象,滲透降低,使結晶紫-碘複合物(CV-I)流於細胞質中無法容出,仍保持紫色;而革蘭氏陰性細菌的細胞壁則富含脂蛋白(lipoprotein)和脂多醣(lipopolysaccharide),且胜肽糖層較薄,使用乙醇處理托瑟十,會將細胞壁的脂質溶解,使壁的孔隙變大,滲透性增加,很快溶出結晶紫-碘複合物
乙醇脫色及Safranin染色的步驟。
乙醇脫色~決定細菌為無色或有色的關鍵步驟
Safranin染色~決定背景顏色的關鍵步驟
使用Thermus培養基作培養