Objetivo:

Secuenciar el producto de la PCR para poder identificar al microorganismo amplificado.

Fundamento:

El fragmento de DNA amplificado por PCR contiene regiones conservadas y regiones variables. La lectura de la secuencia de nucleótidos de las regiones variables y su posterior análisis, nos permitirá identificar la especie amplificada.

Realización de la práctica:

1. En primer lugar hay eliminar del tubo donde ha tenido lugar la reacción de la PCR, los primers que se usaron para amplificar. Para ello se trata con una enzima que digiere todos los fragmentos de DNA de cadena sencilla y no actúa sobre los de cadena doble:

Obtendremos la secuencia de nucleotidos de nuestro DNA amplificado.