製膠

簡介:

本次的蛋白質電泳(SDS-PAGE)是一種依分子量分離不同蛋白質的技術，透過介面活性劑SDS破壞蛋白質結構使其伸展開來並帶負電。膠體分成上下膠，上下層pH值不同，功能也不同。上層膠體的目的是堆積，高pH值使解離度加大，buffer的正負離子壓迫蛋白質使其集中。下層則讓蛋白質根據分子量分離開來。另外，APS的濃度導致上下膠孔洞上大下小，蛋白質從快到慢，對於蛋白質在交界處的集中非常重要。

實驗過程

✰組裝膠架

1.將玻璃及鋁片用酒精擦拭乾淨

2.組合鋁片、spacer、玻璃於製膠台上，將螺絲鎖緊

3.灌入ddH2O，確保製膠架沒有漏縫

4.用長圖畫紙把裡面的水分吸乾

✰製作下膠

1.在50ml離心管中依序加入H2O4：4.6ml

29% Acrylamide Mix：2.7ml

1.5 M Tris (pH 8.8)：2.5ml

10% SDS：100µl

TEMED：6µl

1% TCE(2,2,2-Trichloroetnanol：100µl

10% Ammonium Persulfate (APS) ：100 µl(因為會導致快速凝

結，所以必須最後加入)

2.用1000µl的Pipetman混和後灌入膠架至約6成的高度

3.緩緩用水注滿製膠架

4.製入烘箱烘乾約15分鐘，取出

5.倒出水分，用短圖畫紙擦乾膠架內部水分

✰製作上膠

1.在50ml離心管中依序加入H2O4：3.4ml

29% Acrylamide Mix：830µl

1.0 M Tris (pH 6.9)：630µl

10% SDS：50µl

TEMED：5µl

10% Ammonium Persulfate (APS) ：50 µl(因為會導致快速凝

結，所以必須最後加入)

2.用1000µl的Pipetman混和後灌注滿膠架

3.小心插入尺梳，避免留下氣泡

3.等待一個小時，使凝膠凝固。

✰取出膠體

1.將置膠架的螺絲旋開，小心將鋁片與玻片夾緊拿起。

2.在水下

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