內切酶是能從DNA分子中間水解磷酸二酯鍵(核酸分子中磷酸基團的磷原子與另外兩個五碳醣分子的碳原子之間形成的共價鍵),從而切斷雙鏈DNA的核酸水解酶。外切酶則是從分子鏈的末端順次水解磷酸二酯鍵而生成單核苷酸作用的酶。(如右圖所示,1為外切酶作用方式,2為內切酶作用方式)
★磷酸二酯鍵(圖中磷酸基團與五碳糖連結處):
限制酶為內切酶之一,具高度專一性,依類型不同切割範圍從數千個鹼基到數十個不等,可分為三種類型
第一型
同時具有修飾及認知切割的作用;另有認知DNA上特定鹼基序列的能力,通常其切割位點(距離認知位點可達數千個鹼基之遠,並不能準確定位切割位點,所以不常使用。
第二型
只具有認知切割的作用,修飾作用由其他酵素進行。所認知的位置多為短的迴文序列(同一股DNA上,鹼基序列頭尾互補 );所剪切的鹼基序列通常即為所認知的序列。是遺傳工程上,實用性較高的限制酶
第三型
與第一型限制酶類似,同時具有修飾及認知切割的作用。可認知短的不對稱序列,切割位與認知序列約距24-26個鹼基對,並不能準確定位切割位點,所以不常使用
參考資料 小小整理網站https://smallcollation.blogspot.com/2013/08/restriction-enzyme.html#gsc.tab=0限制酶EcoRI作用方式
✦實驗:步驟2