講師:林玉俊教授
右圖為綠螢光蛋白結構,由11條 β 平板結構組成「罐頭」外型,內部有一α 螺旋,中央有由第65,66,67胺基酸組成的發光結構,受到保護,避免外界干擾,已穩定吸收與發出的光波長。不同的螢光蛋白其發光團結構不同,能夠吸收,放出的光波不同,顏色也會不同
2008 年,諾貝爾化學獎頒給日本化學家下村脩(Osamu Shimomura)、美國科學家馬丁‧查爾菲(Martin Chalfie)和美籍華裔科學家錢永健(Roger Y. Tsien)3人,表彰他們「發現和應用了綠色螢光蛋白質」
這是一種存在於維多利亞多管發光水母的蛋白質,這些水母在受到刺激時便會發光,下村脩先生在其中發現一種蛋白,他在洋下是綠色的,在鎢絲燈下則呈現黃色,而在紫外光照射下會發出綠色螢光。
維多利亞多管發光水母 /學名:Aequorea victoria
它的發色團由65至67位的三個氨基酸(Ser-Tyr-Gly)殘基組成,包裹在一個β折疊形成的桶裝結構中。當蛋白質鏈折疊時,這段被深埋在蛋白質內部的氨基酸片段經環化,脫水形成咪唑酮。在分子氧存在的條件下,發色團可進一步發生氧化脫氫,最終形成螢光。
它們需要在氧化狀態下產生螢光,強還原劑或者酸性條件能使它們轉變為非螢光形式,但只要重新暴露在空氣或氧氣中,它們就會立刻恢復發光。它們只需要氧氣作為底物便可以發光,不需要任何外源反應底物,這個特性使這種螢光蛋白在近代生物領域的研究上被廣泛使用。
螢光顯微術
原理:樣品照射特定波長的光,被螢光團吸收,導致其反射波長更長的光。
在生物學的研究哩,這個技術常常被拿來標定生物分子,而螢光顯微鏡也就更為重要了。
螢光顯微鏡:以水銀燈或氙氣燈為光源,搭配激發濾片、發散濾片
紅色螢光:內質網,與核膜相連,圖中亦可看見細胞核的輪廓
黃色螢光:粒線體,呈現絲狀
藍色螢光:高基氏體,可看出堆疊構造。
粒線體形態大不同?!
長得像半蹲馬桶的小構造?
實際上的粒線體是呈現不規則狀的絲狀小構造!