光譜儀基礎操作與葉綠素光譜掃描

實驗器材

實驗步驟

1.  取水2ml 至入比色管並放入光譜儀 調整穿透率至100並歸零

2.  放入樣品2ml 至入比色管並放入光譜儀 並測量吸光值

實驗結果

全光譜掃描

葉綠體光反應實驗

實驗目的

       透過穿透率的數值比較，了解葉綠體在有無光照下的光反應效率。我們加入DCIP作為NADP+的替代品，當DCIP被還原時顏色將由藍色轉為透明，穿透率將升高，吸光值下降。另外我們加入DCMU（光合作用抑制劑，會阻礙電子從光系統 II 到輔酶的流動），並觀察光反應的效率。（下圖為DCIP還原反應）

實驗器材

實驗步驟

1. 以蔗糖水溶液作為等張溶液，從植物中分離出葉綠體並過濾

2. 以蔗糖水溶液作為溶劑，調出適合的濃度：依序以cuvette每次稀釋2倍，直至Abs.值(吸光值) 0.4-0.6

3. 完成後加入100μL DCPIP混合均勻，測量於 590 nm 的吸光值 (使用 590 nm 的燈卡)

4. 依照四個欲探討的項目各操作不同的變因 (詳見底下結果紀錄)

實驗結果

【全黑】: 將cuvette留在光譜儀中，每30秒記錄一次A590

【照光】: 重複步驟2和3，用手電筒從上方貼附cuvette照射，每30秒記錄一次A590

【加DCMU】: 重複步驟2和3，但在加入DCIP前，先加入100μLDCMU反應2min，再用手電筒照射cuvette，每30秒記錄一次A590

心得

       最後一節實驗課由林立元教授來帶我們進行課程，早上我們先學如何操作光譜儀，校正並訓練滴定技術：通過固定稀釋倍率，使吸光值符合線性函數。我們還有去看連續光譜儀，那台跟我們用的光譜儀差在：連續光譜儀可以呈現連續波長的光源，而我們使用的光譜儀只能用燈卡配合機器計算吸光值，所以連續光譜儀的結果呈現比較直觀。下午的實驗出現了一些波折，我們的實驗數據與理論不符，導致三次實驗均須重做。幸好有助教和教授的指導與提問，還有組員間的互相鼓勵與支持，我們最終發現實驗的誤差所在。經過再次過濾濾液，實驗結果終於符合假說。經過充實的一節課，我們有幸體驗到實驗失敗的滋味，我們重新審視每個步驟，發現問題並加以改正。最終成功完成實驗，這讓我們深刻體會到堅持和細心的重要性，並重拾信心。 

參考資料

• https://zh.pngtree.com/freebackground/up-close-view-of-natural-green-plant-background-luscious-texture-of-linden-tree-leaves-and-flowers_15201622.html

• https://zh.wikipedia.org/zh-tw/2,6-%E4%BA%8C%E6%B0%AF%E9%9D%9B%E9%85%9A#/media/File:DCPIP-reduction-2D-skeletal.png

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• 自行製作表格