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摘要
摘要
一般的細胞染色，大多只能讓我們看見細胞的外觀，而不能清楚的看見內在的構造；然而對於螢光染色來說，這件事絕對不成問題。螢光染色可以讓我們看見活細胞的內部構造如高基氏體、各種細胞骨架、內質網等，並能用不同顏色的螢光蛋白標記；螢光蛋白也可以結合到DNA上，讓我們能看見細胞分裂的過程，進而定義分裂前期、前中期、中期......等細胞分裂階段。細胞螢光影像對於細胞生物學研究有顯著的貢獻，這次課程讓我們有接近這些技術的機會，讓我們見識這些螢光影像的前世今生。
細胞螢光染色法
細胞螢光染色法
直接染色、免疫染色和GFP基因重組等都能達到細胞螢光染色的效果。
直接染色，像是Hoechst染劑，能夠通過活細胞的細胞膜及核膜，嵌合在DNA上，激發時發出藍色螢光；Calcein AM也能通過細胞膜，經過胞內的酯酶（esterases）轉換後可被波長495nm光激發，發出綠色螢光，可用來分類活細胞及死細胞。
免疫染色，可分為直接（dierct）與間接（indirect）。固定細胞後加入界面活性劑增加膜通透性，使抗體能進入細胞與目標蛋白結合。若是直接免疫染色，則螢光蛋白直接接在一級抗體上；若為間接免疫染色，則需加入二級抗體與一級抗體結合，而螢光蛋白接在二級抗體上。為防止抗體的非特異結合，需要加入血清等執行blocking。
GFP基因重組則是將GFP基因插入目標蛋白基因的前後，讓GFP與目標蛋白一起被轉譯出來，從而在目標蛋白處發出螢光。用於觀察活細胞。
共軛焦顯微鏡與細胞螢光影像
共軛焦顯微鏡與細胞螢光影像
Confocal Microscope and Cell Fluorescent images
問題討論
問題討論
1. 細胞中只有一個高基氏體嗎？高基氏體為何都畫在細胞核的一側？
1. 細胞中只有一個高基氏體嗎？高基氏體為何都畫在細胞核的一側？
Golgi apparatus are labelled with green fluorescence.
顯然否。細胞裡有成千上萬個高基氏體。
在細胞分裂時，*為了避免有子細胞沒有分到高基氏體，細胞會先將高基氏體打散，胞質分裂後再利用中心粒伸出的微管引導小高基氏體零件組成完整的高基氏體。於是，組合成的高基氏體聚集在中心體附近，也就是細胞核的一側。（然而，這個機制的產生不也是因為高基氏體在細胞核的一側嗎？）
2. 粒線體的型態到底如何？
2. 粒線體的型態到底如何？
Mitochondria is labelled red with MitoTracker Red CMXRos.
課本所畫只是為了讓學生看見內部構造，實際上粒腺體根本不長那樣，也沒有那麼少又那麼大。
實際影像，簡直就是細菌。
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