Tiras con gradiente de concentración

Descripción breve de la técnica

La técnica de las tiras con gradiente de concentración de antifúngico, como es el caso del sistema comercial Etest®, se basa en una combinación de las pruebas de dilución y difusión. Las tiras que se utilizan en esta técnica son generalmente de un material plástico o de papel y contienen un gradiente de concentración del agente antifúngico deseado. Cuando la tira se aplica sobre una placa de medio de cultivo sólido (generalmente RPMI 1640 suplementado con un 2% p/v de glucosa, aunque este aspecto puede variar) inoculada con el hongo a analizar, se produce una liberación inmediata del agente antimicótico desde la tira hacia la matriz de agar, generándose directamente debajo de la tira un gradiente predefinido, continuo y estable de las concentraciones del fármaco. Tras la incubación, se observa una elipse de inhibición del crecimiento fúngico simétrica y centrada a lo largo de la tira y se procede a la determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI).

El procedimiento de la técnica es relativamente sencillo. Se parte de un cultivo fresco del hongo a analizar a partir del cual se prepara una suspensión en solución salina (0,85% NaCl, p/v) de células, en el caso de las levaduras, o de esporas, en el caso de los hongos filamentosos. En general, la concentración de células en dicha suspesión debe estar en torno a 1-5 × 106 unidades formadoras de colonias (UFC) por mililitro, lo que equivale a un patrón McFarland de 0,5 ó 1, según la especie fúngica analizada. A continuación, la suspensión de células o esporas es extendida con la ayuda de una torunda de algodón sobre la superficie de una placa de medio de cultivo sólido y se deja secar durante unos 15 minutos. Una vez inoculada la placa del ensayo, se procede a depositar sobre su superficie la tira que contiene el antifúngico. Posteriormente, la placas del ensayo se pone a incubar a la temperatura y tiempo adecuado (generalmente 35ºC durante 24-48 h). Finalmente, se procede a la determinación de la CMI que, en general, se define como la concentración del compuesto en la que el halo de inhibición del crecimiento del aislamiento analizado intercepta a la tira del antifúngico; no obstante, si el compuesto utilizado tiene actividad fungistática, suele ignorarse la presencia de colonias pequeñas dentro de la elipse de inhibición.