6. TRATAMIENTO Y ELIMINACIÓN DE MATERIALES POTENCIALMENTE CONTAMINADOS

En primer lugar, todo material " sucio " de laboratorio, deberá considerarse como de alto riesgo con el potencial de transmitir infecciones. Por lo que se deben tomar las medidas adecuadas en su manejo y descontaminación.

Existen tres métodos prácticos para el tratamiento de los materiales de laboratorio desechados y de los desechos contaminados:

• • La esterilización por autoclave.

  • La incineración ( no utilizada en los laboratorios )

  • La desinfección química.

La elección se realiza atendiendo a la naturaleza de los materiales; si es desechable o recuperable y, en este último caso, si se ve afectado por el calor. Con ciertas excepciones, ninguno de estos métodos excluye a los demás. Puede verse en la más abajo que la incineración sola únicamente puede aconsejarse si el incinerador se halla bajo el control del personal del laboratorio. La desinfección sola es aconsejable únicamente para las pipetas graduadas recuperables.

Organización del área de desinfección y descontaminación :

Los diseños del área de limpieza y esterilización para tratar los materiales de laboratorio desechados deben incluir autoclaves, un trituradora, una unidad de eliminación de basura conectada por tubería de plomo al alcantarillado público, fregaderos hondos, máquinas para lavar material de vidrio, estufas de desecación, estufas de esterilización y mesas grandes deacero inoxidable.

Estas habitaciones deben tener disposición adecuada para evitar cualquier posible mezcla de materiales contaminados y descontaminados. Los arquitectos deben trabajar por tanto, sobre un diagrama de flujo o un plano de vías críticas, tomando especial cuidado en la eliminación del vapor del autoclave.

El material contaminado llega en sus recipientes de color codificado a una bancada o una zona designada y utilizada únicamente para este fin. Se separan seguidamente de acuerdo con su color y se envían al incinerador o se cargan en el autoclave. No hay ningún cruce en esta zona. Tras la esterilización en el autoclave, los contenedores se llevan a la mesa de separación

Antes de ser esterilizado al autoclave, deben quitarse las tapas desechables y después incluidas en la carga del autoclave de manera que no dificulten la penetración del vapor. Deben quitarse las ligaduras de las bolsas de plástico y abrir por completo las bolsas en las cestas o cubos que las mantienen.

Materiales de vidrio contaminados :

Después de esterilizarlos al autoclave, los medios de cultivo pueden verterse o extraerse y los tubos, frascos, etc., se lavan a mano o mecánicamente con un detergente adecuado. El tipo de líquido o polvos de lavado que se utilice dependerá de la dureza del agua suministrada y del método de lavado. Deben tenerse en cuenta las recomendaciones de varios fabricantes de detergentes de laboratorio.

Los laboratorios con mucho trabajo precisan máquinas de lavado de material de vidrio. Antes de adquirir una de estas máquinas es preferible estudiar varias de ellas y preguntar a otros laboratorios cuáles son los modelos de que disponen que consideran satisfactorios. No todas las máquinas de lavado de material de vidrio son tan buenas como proclaman sus fabricantes. Un requisito previo es un buen aporte de agua destilada o desionizada.

Si se realiza el lavado a mano, son necesarias piletas dobles, para el lavado y para el aclarado posterior y además, cuencos de plástico o de acero inoxidable para el aclarado final en agua destilada. El agua destilada de alambiques no revestidos, independiente de la conducción de vapor, es raro sea satisfactoria para el trabajo bacteriológico. La tecnología moderna tiene a disposición maquinas lavadoras automatizadas para éste fin y otras por el método de sonificación.

Los revestimientos de goma de los tapones a rosca deben separarse y lavarse por separado los revestimientos y los tapones y unirlos después. Son útiles para esto los coladores o tamices fabricados de polipropileno.

El material de vidrio nuevo, excepto el fabricado de borosilicato o material similar, puede requerir neutralización. Cuando se esterilizan al autoclave líquidos en tubos o frascos de vidrio sódico puede liberarse álcali y alterar el pH. La inmersión durante varias horas en ácido clorhídrico al 2-3% es por lo general suficiente, aunque es conveniente comprobar una muestrallenándolos de agua destilada neutra más unas gotas de un indicador apropiado y esterilizándolos en el autoclave.

Vasijas de desechos :

Después de dejarlas toda la noche para permitir que actúe el desinfectante, debe verterse cuidadosamente el contenido de las vasijas a través de un colador de polipropileno. El colador y su contenido se ponen en un cesto desechable y se esteriliza al autoclave.

Deben utilizarse guantes de goma para estas operaciones. Las vasijas de desecho vacías se esterilizan al autoclave antes de volver al laboratorio para su uso posterior. Pueden tener contaminación residual.

Pipetas reutilizables :

Tras sumergirlas totalmente en desinfectante y detergente durante toda la noche, deben retirarse las pipetas con las manos enguantadas.

Antes de lavar las pipetas, deben retirarse los tapones de algodón hidrófilo. Esto se puede hacer insertando su punta en un tubo de goma fijado al grifo de agua corriente. Los tapones que presenten dificultades para retirarlos pueden quitarse con un ganchillo. Se fabrican diversas excelentes máquinas lavapipetas que se fundan en la presión del agua y/o en la acción de sifón, aunque el lavado final debe hacerse en agua destilada.

Ref: Esterilización, desinfección y tratamiento de los materiales infectados.

http://html./esterilizacion-y-desinfeccion-de-instrumentos-de-laboratorio.html

7. METODOS DE DESINFECCIÓN Y ESTERILIZACIÓN

7.1 Métodos Físicos:

-- Calor Húmedo (Ej. Autoclave).

-- Calor Seco (Ej. Horno).

-- Radiaciones (Ej. Ultravioletas).

-- Filtración (Ej. Filtros Millipore ®).

7.2 Métodos Químicos:

-- Antisépticos (Ej. Alcohol).

-- Desinfectantes / Esterilizantes (Ej. Cloro).

8. VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS MÉTODOS

8.1 Métodos Físicos:

8.1.1 Calor Húmedo: Autoclave

El Autoclave es el aparato más comúnmente utilizado en los laboratorios para esterilizar cultivos y soluciones que no se desnaturalicen a temperaturas mayores a 100°C. Una temperatura de 121 °C ( 15 Lbs de presión) con un tiempo de exposición de 15 minutos sirve para destruir microorganismos, incluso los formadores de esporas.

Ventajas del calor húmedo:

• • Rápido calentamiento y penetración.

  • Destrucción de bacterias y esporas en corto tiempo.

  • No deja residuos tóxicos.

  • Hay un bajo deterioro del material expuesto.

  • Económico.

Desventajas del Calor Húmedo:

• • No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua.

  • Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metálicos.

Materiales que se pueden esterilizar con vapor:

- Material textil - Material de vidrio- Material de goma- Instrumental quirúrgico de acero inoxidable- Soluciones acuosas - Todo aquel material cuyo fabricante certifique pueda ser esterilizado por vapor.

Materiales que no se pueden esterilizar con vapor:

- Sustancias oleosas- Sustancias grasas- Polvos- Instrumental quirúrgico cromado o niquelado- Artículos eléctricos sin cobertura especial- Todo material que no tolera la exposición al calor y a la humedad.

AUTOCLAVE

MOVIMIENTO DEL VAPOR DENTRO DE LA AUTOCLAVE

Relación de Presión Vs Temperatura en el Autoclave

Presión ( Libras ) Temperatura (º C )

5 108

10 116

15 >>>>>>>>>>> 121

20 127

25 131

30 134

Resumen de un ciclo esterilización en autoclaves:

1. Se abre la válvula de admisión de vapor a la camisa precalentando la cámara.

2. Al terminar de salir el aire de la camisa, se abre la válvula que comunica camisa y cámara permitiendo la entrada de vapor a la cámara.

3. Cuando el vapor ocupa totalmente la cámara y el termómetro marca la temperatura establecida empieza el ciclo de esterilización.

4. Al terminar el ciclo se expulsa el vapor de acuerdo a necesidades: lentamente si se trata de líquidos para evitar una descompresión rápida o rápidamente si se trata de otras cargas.

5. Una vez expulsado el vapor se abre la válvula que comunica la camisa con la atmósfera. Se produce presión negativa y se realiza el secado por medio de la succión de aire en la cámara.

En los autoclaves de desplazamiento por gravedad que son los primeros modelos fabricados, el tiempo de penetración es prolongado por una incompleta penetración de aire y por lo tanto los tiempos de esterilización también son mayores. En la actualidad aún cuando funcionan con el mismo principio, facilitan su operación y aumentan el nivel de seguridad por medio de la incorporación de controles automáticos, bomba de vacío y microprocesadores.

8.1.2 Calor Seco: Horno

Todos los microorganismos son susceptibles en distinto grado, a la acción del calor. El calor provoca en ellos coagulación y desnaturalización de sus proteínas.

La efectividad del calor como método de esterilización depende de :

-- Temperatura

-- Tiempo de exposición

La estufa de esterilización ( Horno ), es el artefacto utilizado en los laboratorios para esterilizar por calor seco. Se requiere mayor temperatura y tiempo de exposición que el autoclave. La temperatura varía entre 120° y 180°C, requiriéndose distintos tiempos de exposición. A 140°C se necesitan por lo menos 5 horas de exposición, mientras que a 160°C se requieren al menos 2 horas de exposición.

HORNO

Ventajas del Calor Seco:

• • No es corrosivo para metales e instrumentos.

  • Permite la esterilización de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no volátiles.

Desventajas del Calor Seco:

• • Requiere mayor tiempo de esterilización, respecto al calor húmedo, debido a la baja penetración del calor.

Materiales que pueden esterilizarse por calor seco.

• • Instrumental quirúrgico cromado- Materiales de vidrio, aluminio o porcelana- Aceites, parafina, sustancias grasas, vaselina- Polvos (talco).

Materiales que NO se pueden esterilizar por calor seco

- Material textil (algodón, sedas, lino, etc.)

- Gomas - Materiales sintéticos - Todo material que se altere a la temperatura trabajo.

Temperatura

La temperatura de esterilización por Calor Seco deberá estar entre 160 °C – 170 °C.

Tiempos

El tiempo de exposición del material se determina mediante la correspondiente validación del ciclo.

El material a esterilizar se deberá cargar con el esterilizador frío, teniendo en cuenta las siguientes recomendaciones:

Cada unidad deberá quedar separada de las vecinasLos materiales no deberán estar en contacto con las paredes, piso y techo del esterilizador. La carga del esterilizador será homogénea y no deberá superar el 80% de la capacidad total de la cámara

Etapas del ciclo de esterilización por calor seco :

1. Colocar el material dentro del Esterilizador2. Encender el Esterilizador3. Verificar que los instrumentos de control de ciclo, tiempo y temperatura se encuentren en la posición correcta4. Esperar hasta que los instrumentos de medición registren la temperatura seleccionada para el ciclo5. Cuando se alcance la temperatura seleccionada, se comenzará a descontar el tiempo de esterilización 6. Cumplido el tiempo de exposición se apagará el Esterilizador7. La descarga del Esterilizador se efectuará una vez que el material se haya enfriado

Precauciones

Durante el ciclo de Esterilización no deberá abrirse la puerta del Esterilizador porque ello implicaría abortar el ciclo, debiendo en este caso recomenzarlo.

Otros agentes físicos:

- Radiaciones ionizantes (rayos Gamma)

- Luz ultravioleta

- Filtración (Filtros Millipore ®)

- Ultrasonido

8.2 Métodos Químicos:

La efectividad de estos agentes depende de las condiciones bajo las que actúan:

• • Concentración: varía con el tipo de agente y de microorganismo, pues una misma concentración del agente puede producir un efecto diferente en distintos microorganismos.

  • Tiempo: Los microorganismos no son susceptibles a un agente en la misma forma, por lo que no todos los microorganismos mueren al mismo tiempo.

  • pH: el pH determina el grado de disociación y la efectividad del agente químico, pues a menor disociación, mayor permeabilidad y mayor efectividad.

Listado de Desinfectantes (agrupados por su radical químico)

• • Compuestos Fenólicos:

  • Fenoles

  • Cresoles

  • Alcoholes:

  • Etílico

  • Isopropílico

  • Halógenos:

  • Yodo

  • Cloro

  • Oxidantes:

  • Peróxido de hidrógeno

  • Permanganato de potasio

  • Colorantes:

  • Azul de metileno

  • Giemsa

  • Acridina

  • Metales Pesados:

  • Bicloruro de mercurio

  • Nitrato de plata

  • Vapores y Gases:

  • Formaldehído (2 – 5 %)

  • Ozono (O3)

  • Oxido de etileno

  • Glicol.

  • Ácidos:

  • Ácido acético (1%)

  • Ácido bórico

9. RECOMENDACIONES GENERALES PARA EL USO DE LOS DESINFECTANTES

• • No deben mezclarse en un mismo recipiente productos antisépticos o desinfectantes de distinta composición.

  • No se debe modificar la concentración establecida para cada procedimiento.

  • Nunca se deben tapar utilizando cubiertas de metal, algodón, gasa, corcho o papel. Usar la tapa original.

  • Una vez que se vierte el contenido del desinfectante o antiséptico, no deben retornarse a su envase original.

  • Nunca debe llenarse un envase semivacío a partir de otro.

  • Las diluciones deben hacerse a la temperatura, y según el procedimiento indicado por el fabricante.

  • Deben almacenarse en áreas secas, ventiladas y protegidas de la luz.

  • Vigilar y controlar la fecha de vencimiento de los antisépticos y desinfectantes

Selección de un desinfectante :

• • Tipo y cantidad aproximada de microbios.

  • Tipo y cantidad de materia orgánica presente.

  • Tiempo de contacto.

  • Tipo de superficie a ser desinfectada.

  • Descripción de la fecha de eficacia e instrucciones de su uso.

  • Seguridad y aceptabilidad ambiental del producto.

  • Buena actividad residual.

  • Costos. No necesariamente lo mejor es lo más costoso.

TAMPOCO AHORRE DINERO A COSTA DE LA SEGURIDAD PERSONAL

10. LOS TIPOS DE GERMICIDAS Y SUS MECANISMOS DE ACCIÓN

10.1 Inorgánicos :

1.- Metales: Los más efectivos son el mercurio, plata ,cobre y zinc. Actúan inactivando las proteínas celulares al combinarse con ellas. Entre los compuestos de mercurio que se emplean como antisépticos en heridas superficiales de la piel y mucosas están el mercurocromo (mercromina) y el mertiolato. Entre los compuestos de plata utilizados como antisépticos está el nitrato de plata (AgNO3) . Entre los compuestos de cobre se encuentra el sulfato de cobre (CuSO4) que se utiliza como algicida en los recipientes abiertos que contienen agua. Los compuestos de zinc también son fungicidas por lo que se utilizan para tratar el pie de atleta2.- Acidos y álcalis: Actúan alterando la permeabilidad y coagulando las proteínas. En general los ácidos son más eficaces que los álcalis. Dentro de estos compuestos se encuentran el sulfúrico (H2SO4), nítrico (HNO3), hidróxido sódico (NaOH) e hidróxido potásico (KOH). 3.- Compuestos inorgánicos oxidantes: actúan oxidando los componentes de la membrana y enzimas. El agua oxigenada (H2O2) al 6% (20 volúmenes) se utiliza como antiséptico en pequeñas heridas de la piel.4.- Halógenos: Los halógenos especialmente el cloro y el iodo son componentes de muchos antimicrobianos. Los halógenos son agentes fuertemente oxidantes por lo que son altamente reactivos y destructivos para los componentes vitales de las células microbianas. El iodo es un antiséptico y el cloro un desinfectante.

a) Cloro: La muerte de los microorganismos por acción del cloro se debe en parte a la combinación directa del cloro con las proteínas de las membranas celulares y los enzimas. El cloro es un desinfectantes que actúan sobre proteínas y ácidos nucleicos de los microorganismos. El producto clorado más utilizado en desinfección es el Hipoclorito de sodio ( NaOCl ), que es activo sobre todas las bacterias, incluyendo esporas. El hipoclorito de sodio al 1% se puede utilizar como desinfectante doméstico y hospitalario, y de hecho es el más barato, pero también el más efectivo. La única desventaja reconocida es su relativa toxicidad provocando reacciones alérgicas en algunas personas. Aparte se describen los síntomas ( Página No. 34 ).

Concentración del cloro puro casero : 5.25 %

Concentración útil : 1 al 2 %

El Cloro es un biocida de amplio espectro barato y eficaz, que se utiliza en disoluciones de 500- 5000 ppm para desinfección medioambiental Sin embargo, una vez disuelto, los átomos de cloro tienen una vida media muy corta y para que el formulado tenga efecto, debe ser preparado in situ antes de su utilización.

NOTA: Si la solución comercial de Hipoclorito de Sodio es al 5.25%, la solución al 1% se prepara mezclando 1 litro de solución comercial y 4.25 litros de agua.

También se puede utilizar el siguiente método:

Ejemplo: Tenemos Cloro comercial al 5% y deseamos preparar un litro al 0.5% (5000 ppm).

FORMULA :

CD x VD

V = --------------

CC

VD : Volumen deseado.

CD : Concentración deseada.

CC : Concentración conocida.

0.5% x 1000 c.c.

V = -------------------- = 100 c.c.

5%

Por tanto, se debe agregar 100 c.c. de hipoclorito de sodio al 5% a 900 c.c. de agua para tener 1000 c.c. de una dilución al 0.5%.

Compuestos de amonio cuaternarios :

Son agentes desinfectantes por su acción detergente, rompen la membrana citoplasmática debido a que disuelven las capas lipídicas, además desnaturalizan las proteínas. Son detergentes catiónicos eficaces contra bacterias vegetativas y algunos hongos, aunque no contra las mycobacterias ni esporas. Son inactivados por las proteínas y por una diversidad de materiales naturales y plásticos, por los detergentes no iónicos y por el jabón. Su utilización en el laboratorio es por tanto limitada, aunque tienen la clara ventaja de ser estables y de no corroer los metales. Se emplean generalmente a diluciones de 1-2% para la limpieza de superficie e instrumentos.

Los compuestos de amonio cuaternario no son tóxicos y son inofensivos para la piel y los ojos.

Ej. Cetrimida, Cloruro de benzalconio, etc.

b) Iodo: El mecanismo mediante el cual el iodo ejerce su acción antimicrobiana es debido a su acción oxidante. El iodo se puede utilizar como antiséptico bajo dos formas:

• • i) tintura de iodo, es una solución alcohólica (tintura) de iodo (I2) más ioduro potásico (KI) o ioduro sódico (NaI).

  • ii) ii) iodóforos, son mezclas de iodo (I2) con compuestos que actúan como agentes transportadores y solubilizadores del iodo. Por ejemplo, la povidona iodada (Betadine) es un complejo de iodo y polivinil pirrolidona (PVP).

Los agentes alquilantes actúan añadiendo pequeñas cadenas de átomos de carbono a las enzimas, que como consecuencia quedan inactivadas, lo que ocasiona la muerte de las células. El formaldehído, la formalina y el glutaraldehído son algunos de estos compuestos.

El óxido de etileno es un compuesto gaseoso que se utiliza como agente esterilizante para el tratamiento de material termosensible y objetos voluminosos que no pueden ser esterilizados mediante otros sistemas. Sin embargo, es un compuesto muy tóxico para la especie humana y su uso ya ha sido reemplazado por otros más seguros.

10.2 Orgánicos :

a) Alcoholes: Los alcoholes actúan desnaturalizando las proteínas, disolviendo las capas lipídicas y como agentes deshidratantes. Se recomienda la utilización del Alcohol Etílico, no desnaturalizado, o Alcohol Isopropílico al 70%. La acción deshidratadora de ambos alcoholes al 95% limita su utilidad, ya que las proteínas deshidratadas resisten la desnaturalización. Eletanol al 70% se usa como antiséptico de la piel y como desinfectante en los termómetros clínicos orales y algunos instrumentos quirúrgicos. El etanol y el isopropanol son utilizados como desinfectantes y antisépticos clínicos. Tomar en cuenta que el alcohol etílico al 70% tiene un efecto bacteriostático y que al 95% su efecto es bactericida.

Su actividad cae bruscamente en concentraciones menores al 50%. Las bacterias sometidas a la acción de alcohol concentrado sufren destrucción de la pared celular, permitiendo el paso de contenido intracelular y componentes de la pared celular al medio externo (endotoxinas). Las bacterias sometidas a la acción de alcohol al 70% sufren una deshidratación menos violenta, conservando la integridad celular. El alcohol se considera un desinfectante de nivel intermedio y se usa en la desinfección de superficies y artículos no críticos

El alcohol tiene la ventaja de no ser corrosivo. El alcohol Isopropílico es hasta cierto grado más germicida que el Etílico, pero es altamente deshidratante.

Las desventajas de los alcoholes en los equipos son que dañan la cubierta de los lentes, tienden a alterar y endurecer el material de goma y plástico, se inactivan en presencia de materia orgánica y se evaporan rápidamente. Esto condiciona que no se deben usar alcoholes como método de desinfección de alto nivel ni para materiales en inmersión.

b) Fenol y compuestos fenólicos: Una solución acuosa al 5% de fenol mata rápidamente a las células vegetativas de los microorganismos. Sin embargo, las esporas son mucho más resistentes al fenol. Debido a que el fenol es tóxico y tiene un olor desagradable ya casi no se usa como desinfectante o antiséptico, siendo reemplazado por compuestos fenólicos que son sustancias derivadas del fenol menos tóxicas y más activas frente a los microorganismos. Lysol es una mezcla de compuestos fenólicos que se utiliza para desinfectar objetos inanimados como los suelos, paredes y superficies. El fenol y compuestos fenólicos actúan alterando la permeabilidad de la membrana citoplásmica así como desnaturalizando proteínas. El hexaclorofeno es un compuesto fenólico que ha sido reemplazado por la clorhexidina, menos tóxica para la especie humana.

Recomendaciones generales :

a) No deben mezclarse en un mismo recipiente productos antisépticos o desinfectantes de distinta composición.

b) No se debe modificar la concentración establecida para cada

procedimiento.

c) Nunca se deben tapar utilizando cubiertas de metal, algodón, gasa, corcho o papel. Usar la tapa original.

d) Una vez que se vierte el contenido del desinfectante o antiséptico, no deben retornarse a su envase original.

e) Nunca debe llenarse un envase semivacío a partir de otro.

f) Las diluciones deben hacerse a la temperatura, y según el

procedimiento indicado por el fabricante.

g) Deben almacenarse en áreas secas, ventiladas y protegidas de la luz.

h) Vigilar y controlar la fecha de vencimiento de los antisépticos y

desinfectantes

16. AGRADECIMIENTO

Quisiera agradecer al personal de limpieza y esterilización del Laboratorio Clínico del CHMDrAAM, por sus atinadas recomendaciones en la elaboración de éste Manual.

De igual manera, quisiéramos agradecer y valorar en su justa medida la labor callada pero eficiente de la sección de lavado y esterilización, que con su trabajo diario ayudan a evitar infecciones ocasionadas por los materiales contaminados, pensando en todo momento en la salud del personal.