藍忠昱 教授

課程內容：

簡介微生物學，微生物學中的微生物，分為:細菌 病毒 真菌 原生動物 藻類，大部分介紹古細菌，例如:

最後，透過實作，了解細菌染色的操作。

革蘭氏染色 Gran's staining

菌種：大腸桿菌 G(-)、枯草桿菌 G(+)

實驗原理：

革蘭氏染色法是由丹麥微生物學家Hans Christian Gram於1884年所發明，依據細菌細胞壁所構成的成份不同，利用這種染色法，可初步對細菌分類

革蘭氏陽性菌：細胞壁肽聚醣層較厚，染劑保留在菌體內呈現紫色或藍紫色

革蘭氏陰性菌：細胞壁肽聚醣層較薄，染劑不易保留在菌體內所以呈現紅色

實驗步驟：

1.  用 pipetman 取5μl 無菌水滴在載玻片上

2. 用 tips 輕輕在有含有菌種的培養基上塗抹，並移植在載玻片

3. 熱固定法(用火燒乾水分使細菌留在載玻片上)製備細菌抹片

4. 初染-結晶紫（crystal violet），10 秒後用二次水沖洗，擦手紙拍乾

5.  媒染-碘液（Gram’s iodine），10 秒後用二次水沖洗

6. 去色-95%酒精（95% EtOH），洗至沒有染劑顏色流出，10 秒後用二次水沖洗

7. 回染-番紅（safranin），10 秒後用二次水沖洗

8. 蓋上蓋玻片後使用顯微鏡觀察，先用40X的鏡頭找位置，再用100X 鏡頭(需使用鏡油)觀察

※圖片為物鏡100X油鏡

簡單染色 Simple staining

菌種:大腸桿菌(E.Coli)

實驗原理：

利用帶正電的單種染劑，觀察菌體型態

實驗步驟:

1. 以熱固定法製作細菌抹片:

• 用 pipetman 取5μl 無菌水滴在載玻片上

• 用 tips 輕輕在有含有菌種的培養基上塗抹，並移植在載玻片

• 用酒精燈將在玻片上的水燒乾，即完成細菌抹片

2. 以Crystal violet (結晶紫) 滴一滴染色40秒

3. 以二次水清洗多於染料

4. 使用擦手紙將玻片擦乾(避開菌種)

5. 先用40倍物鏡找到菌體，再用100倍油鏡觀察，並拍照紀錄

課程心得：

簡單染色法

革蘭氏染色法

透過課程活動，熟練我們對於革蘭氏染色法的操作，實驗過程步驟雖簡單，卻不可輕忽，每個環節每個步驟都不能出差錯，一定要耐心完成，更是要小心對待菌種，一旦操作不謹慎，導致菌種消失，就要全部重做。

在本次實驗中，我透過不直接接觸樣本，在添加染劑與洗淨樣本時小心操作，間接接觸樣本，儘量不使樣本被清除，最後終於如願拍到染色後的大腸桿菌與枯草桿菌在顯微鏡下的樣子。