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La espectrometria de masas nativa se realiza en el espectrómetro Exactive Plus EMR, de tecnologia Orbitrap, a cargo del académico Dr. Nelson Barrera Rojas (nbarrera@bio.puc.cl). Éste equipo posee un generador de iones nanoESI y se encuentra acoplado a un inyector de jeringa. Está especializado en determinar proteinas en estado nativo (no-denaturadas), determinar subunidades y estudiar interacciones proteina-ligando.
Determinacion de peso molecular
Determinacion de peso molecular
El espectrómetro permite obtener el peso molecular de una proteína completa mediante sus multiples estados de carga generados por electrospray
Identificación de subunidades
Identificación de subunidades
A partir de una proteina multimerica, al aumentar gradualmente su energía interna con el espectrómetro, se pueden detectar las subunidades que la componen hasta llegar a los monomeros. A partir de esa información se puede saber la cantidad de subunidades que posee la proteína y en caso de ser heteromerica, inferir la estequiometria de dichas subunidades.
Interacciones proteína-ligando
Interacciones proteína-ligando
Con este método, primero se determina el peso molecular de la proteína de interés, luego, a la muestra de proteína se agrega el ligando de interés y se obtiene un nuevo espectro para determinar su peso molecular. Ambos espectros son comparados, y la diferencia de masa entre la versión con ligando presente vs ausente nos entregará cuantos ligandos se unen a la proteína
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