Espectrometría de masas Nativa
La espectrometria de masas nativa se realiza en el espectrómetro Exactive Plus EMR, de tecnologia Orbitrap, a cargo del académico Dr. Nelson Barrera Rojas (nbarrera@bio.puc.cl). Éste equipo posee un generador de iones nanoESI y se encuentra acoplado a un inyector de jeringa. Está especializado en determinar proteinas en estado nativo (no-denaturadas), determinar subunidades y estudiar interacciones proteina-ligando.
Determinacion de peso molecular
El espectrómetro permite obtener el peso molecular de una proteína completa mediante sus multiples estados de carga generados por electrospray
Identificación de subunidades
A partir de una proteina multimerica, al aumentar gradualmente su energía interna con el espectrómetro, se pueden detectar las subunidades que la componen hasta llegar a los monomeros. A partir de esa información se puede saber la cantidad de subunidades que posee la proteína y en caso de ser heteromerica, inferir la estequiometria de dichas subunidades.
Interacciones proteína-ligando
Con este método, primero se determina el peso molecular de la proteína de interés, luego, a la muestra de proteína se agrega el ligando de interés y se obtiene un nuevo espectro para determinar su peso molecular. Ambos espectros son comparados, y la diferencia de masa entre la versión con ligando presente vs ausente nos entregará cuantos ligandos se unen a la proteína