分子遺傳實驗

蛋白質凝膠電泳（SDS-PAGE ）

膠體設計

參考台大Juang Web

http://juang.bst.ntu.edu.tw/Protein/Analysis/A3.htm

上層膠體之膠體濃度較高，不利蛋白質分子之移動，可使樣本蛋白質在其中凝聚成一條細線，以增加電泳的解析力，稱之集膠膠體。

下層膠體之膠體濃度較低，阻力較小，可使不同分子量之蛋白質分離情形更加顯著，方便操作者判讀，稱之分離膠體。

SDS作用

SDS(十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺 )為一陽離子行界面活性劑，在溶液態遇蛋白質時，可切斷蛋白質經摺疊後產生之S-S bond，使蛋白質直鏈化，並以親油端靠近，使分子團整體帶負電，此時便可透過附加電場的方式，使整個分子移動。

結果判讀

https://www.labxchange.org/library/items/lb:LabXchange:02a2a79b:html:1

kDa 約等價於amu，為1/12顆C原子之質量，上端為分子之運動起點，肉眼可見:

隨分子量之增加，蛋白質分子之移動距離明顯下降，故越接近上方起始點之蛋白質分子，分子量愈大

實驗過程

一、下膠製作

1.在50ml離心管中依序加入H2O4：4.6ml

29% Acrylamide Mix：2.7ml

1.5 M Tris (pH 8.8)：2.5ml

10% SDS：100µl

TEMED：6µl

1% TCE(2,2,2-Trichloroetnanol：100µl

10% Ammonium Persulfate (APS) ：100 µl

2.用1000µl的Pipetman混和後灌入膠架至約6成的高度

3.緩緩用水注滿製膠架

4.製入烘箱烘乾約15分鐘，取出

5.倒出水分，用短圖畫紙擦乾膠架內部水分

二、上膠製作

1.在50ml離心管中依序加入H2O4：3.4ml

29% Acrylamide Mix：830µl

1.0 M Tris (pH 6.9)：630µl

10% SDS：50µl

TEMED：5µl

10% Ammonium Persulfate (APS) ：50 µl

2.用1000µl的Pipetman混和後灌注滿膠架

3.等待一個小時，使凝膠凝固。

三、注入待測液並開啟電源

四、觀察結果

由於我們的集膠膠體配太濃，導致電泳1小時候蛋白質還無法穿透集膠膠體