分子遺傳學實驗
Molecular Genetics
Molecular Genetics
PCR (Polymerase Chain Reaction), 聚合酶連鎖反應 不需要記這種繁瑣的學名,只要記得它在生物鑑定上巨大的貢獻
臺灣鴨品種
北京鴨
Anas platyrhynchos domesticus
土番鴨
Cairina Anac
番鴨
Cairina moschata
分子標記探究臺灣鴨身世之謎
土番鴨是北京鴨及菜鴨生出改鴨,再用改鴨和番鴨雜交生出土番鴨,為了證明這一點,我們將三種鴨子的基因拿去做PCR,分析出哪一隻是雜種、其他的是純種。 ⇒ 使用的primer: CAUD006
鑑定鴨子的性別。 ⇒ 使用的primer: CHD
聚合酶連鎖反應 (PCR, Polymerase Chain Reaction)
步驟:
提高溫度,使雙股DNA解開為兩條單股
降低溫度,使小段primer(引子) 辨識目標DNA黏接至單股DNA上
反覆執行步驟1、2,目的為使DNA成指數擴增數量,達成PCR反應
製作Agarose gel (瓊脂凝膠)
將agarose powder溶解於TAE buffer (需微波至溶解),並加入SYBR Safe (DNA Gel Stain)
均勻倒入模具等待冷卻
插入齒梳(comb)以形成凹槽 (well)
稍微避光,防止染劑受UV激發
膠體電泳 (Gel Electrophoresis)
先把 gel 放入電泳槽並加入TAE buffer ,再將 DNA sample 拿出,注入凝膠的凹槽中
將電泳槽電源打開,等待大約20分鐘。由於DNA帶負電因此深色處朝負電
最後將結果放入儀器中,以紫外線檢測之
結果分析
紅色方框內本應該要有一個DNA網格
此實驗結果是錯誤的,primer CAUD006的部分原本應該中間要呈現兩條,中間以知是土番鴨的基因,左邊是北京鴨,右邊是番鴨的,中間兩條很明顯都有左右的基因,證明土番鴨確實是番鴨和北京鴨的產物。
primer CHD的部分是正確的,是鑑定性染色體的PCR,鳥類的性染色體是ZM制,母鳥是ZM而公鳥是MM,因為Z染色體較短,體積較小,因此在洋菜凍中移動距離較遠,M則反,因此從實驗結果判斷中間的土番鴨是公鴨,北京鴨和番鴨是母鴨。
PCR看似簡單,只需要加入特定數量和種類的材料就好了,不須邀刁鑽的操作,但是在操作繁瑣的步驟和混合材料卻需要全神關注。
參考資料