分子遺傳學實驗

黃貞祥老師

黃貞祥

他還是一個很電的老師

信箱：gcsng@life.nthu.edu.tw

辦公室：生科一館409室

辦公室電話：03-5715131 #62587

實驗室分機：03-5715131 #33469

學歷：美國加州大學戴維斯分校遺傳學研究所博士

國立清華大學生命科學學系碩士

國立清華大學生命科學學系學士

領域：演化遺傳學、演化發育生物學、演化鳥類學、分子演化學、演化基因體學

上課內容

北京鴨

北京鴨原產於華北，民國43年由農復會引進後，北京鴨便在台灣生根下來。

目前台灣外銷用，肉用品系佔百分之八十以上，其體型大頗受外銷業者歡迎，在日本、東南亞市場亦占有相當之分量。其主要是提供冷凍鴨肉外銷日本，亦因此而帶動了國內屠宰設備及分切技術的進步。肉質適合烘烤用。

褐色菜鴨

公鴨一般為種用，在自然交配下一隻公鴨可交配三十隻母鴨，母鴨則是主要產蛋品種，一年均可生產近三百個蛋，淘汰後更可作鴨賞之原料。

目前台灣褐色菜鴨群中產青殼蛋者約６５％，因蛋殼顏色與產蛋性能間並無直接的關係存在，因此一般鴨農並未在意白殼蛋或青殼蛋之問題，唯近年來民間對青殼蛋有特殊的偏好，為因應市場需求，宜蘭分所選育有青殼蛋品系，提供生產青殼鴨蛋之母雛，以滿足特殊之市場所需。

土番鴨

為公正番鴨與褐色母菜鴨或改鴨之雜交體，其本身不具生殖能力，佔本省肉鴨消費市場百分之七十左右，早期以飼養二品土番為主，近年來則以飼養三品種土番鴨為主，為優良之肉用品種。

番鴨羽毛顏色分佈很廣，由全身黑褐色至全白，黑色土番鴨喙及腳脛為黑褐色，白色土番鴨為粉紅色，腳脛橙黃色。近年來為因應市場需要，有利用北京母鴨與公番鴨雜交之二品種大型土番鴨，12週齡體重可達3.6公斤，除少部分供應國內特殊的市場需要外，大部分以胚胎蛋外銷東南亞。

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PCR原理

二、操作步驟

(1)變性 : 提高溫度使DNA雙鏈分開

(2)退火 : 降溫後引子接上DNA

(3)延伸 : 核甘酸以引子為起點擴增互補鏈

(4)循環 : 重複前述步驟多次

一、原料 :

DNA模板、引子、DNA聚合酶、去氧核甘三磷酸、鎂離子緩衝體系

三、應用 :

環境微生物學、親緣關係檢測、農業、藥物測試、法醫檢測、基因組學、新冠病毒篩檢 ......

實驗部分

一、聚合酶連鎖反應PCR

二、限制酶核酸內切

三、1.5%瓊脂糖凝膠製備

四、凝膠電泳

五、分子標定螢光顯影

聚合酶連鎖反應PCR

於試管滴加ddH2O、正反引子、MasterMix，平均裝入四支小管中，經過離心機充份混合後，分別加入北京鴨、番鴨、土番鴨的DNA與作為對照組的水，即可送往機器進行PCR反應。

限制酶核酸內切

將上步驟PCR反應的產物分別轉移一半液量於另一批試管，並加入緩衝液與核酸限制酶出充份反應。

1.5%瓊脂糖凝膠製備

配置TAE緩衝液、agarose粉及膠體染劑，經由微波加熱變為透明澄清後，倒入模具等待冷卻。

凝膠電泳

凝膠製作完畢後置於電泳臺中，依序滴加PCR產物以及Marker，開啟電源等待九個跑道之一游至終點線。

分子標定螢光顯影

電泳結束的凝膠於肉眼下不容易辨認，因此可藉由提前標定DNA，是之帶有螢光物質，放入顯影機器後即可清晰得知各跑道物質的位置。

實驗結果

觀察右圖，中線為DNA ladder，藉由比對相對位置可推得物質的分子量，中線左側為未切割的DNA聚合反應產物，由左至右分別是北京鴨、土番鴨與番鴨，最後是對照組，因為沒有被標定的DNA而沒有亮帶，右側亦然，但由於DNA切割過所以有多個螢光帶。

上課心得

我們不是首次接觸PCR，凝膠電泳也做過不少，更別提pipetman和tip的操作，但唯有這堂課程，讓我們真實地感受到沉浸式的實作體驗，並以互動型的教學方式促進思考，不是盲目遵從實驗原理與步驟，相信只有透過思考才能理解其中的問題，提出解決方案，這對於一名科學家勢必是不可或缺的訓練。

綠頭鴨...........呱~

PCR樣品配置

凝膠電泳

分子標記顯影

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