蛋白質電泳

蛋白質電泳

又稱十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺酸凝膠電泳。

實驗步驟

電泳槽組裝

將鋁片與玻璃片對齊，兩側夾上間隔板(spacer)。
壓緊兩塊板子放入架上，按對角線順序鎖緊螺絲。
將膠台鎖在電泳槽上。
在鋁片與玻璃片中間加入蒸餾水進行測漏，若5分鐘後無水漏出，則可用濾紙將水吸乾。

膠體成分與功能

上膠: Stacking Gel，pH6.9，堆疊蛋白質。

下膠: Running Gel，pH8.9，分離蛋白質。

※pH6.9時，甘胺酸(Gly)達等電點。

下膠配置

加入4.6ml H₂O。
加入2.7ml 29% Acrylamide Mix。
加入2.5ml 1.5M Tris。
加入 100μl 10% SDS。
加入 6μl TEMED。
加入 100μl 1% TCE。
加入 100μl 10% APS（下膠前加）。
下膠後插入10 well齒梳。
室溫靜置30~60分鐘待其凝固。

上膠配置

加入4.6ml H₂O。
加入2.7ml 29% Acrylamide Mix。
加入2.5ml 1.5M Tris。
加入 100μl 10% SDS。
加入 6μl TEMED。
加入 100μl 1% TCE。
加入 100μl 10% APS（下膠前加）。
下膠後插入10 well齒梳。
室溫靜置30~60分鐘待其凝固。

Gel Running

拆下齒梳，將well中的泡泡沖掉。
用夾子將膠體夾在電泳槽內。
加入1X running buffer 約300ml，空隙以滴管填滿buffer。
用pipeteman將待測溶液加入well中。

觀察蛋白質膠體

※過程中須持續沖水，保持膠體濕潤，避免破裂。

將buffer倒入水槽。
推出spacer。
用剝膠鏟撬開玻璃或鋁板。
用剝膠鏟把上膠切掉。
將整塊膠鏟起來，放入裝水的盒子。
至UV box拍照。

實驗結果分析

用小畫家比對右下方Marker(可見光下)與實驗組(紫外光下)的照片，並以像素格數判斷距離，計算出分子量。

已知蛋白質A、B可能為牛血清白蛋白(BSA)，或酪蛋白(Casein)，且前者分子量66、後者分子量24。

由右表數據可知：

蛋白質A應為Casein；蛋白質B應為BSA。

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