1. 滴5μl無菌水在載玻片上。

2. 用tip少量沾取培養盤上的菌體，在水中塗開。

3. 以鑷子夾取玻片過火，直到水蒸乾（注意不可長時間停留在同一點，會使細胞死亡，且玻片可能會破碎）。

• 菌種：E.coli

• 正染色法：帶正電染劑，此處使用結晶紫(Crystal violet)。

• 作法：

  1. 滴5μl無菌水在載玻片上。

  2. 用tip少量沾取培養盤上的菌體，在水中塗開。

  3. 熱固定：在酒精燈上來回移動，直到水分蒸發。

  4. 加1~2滴染劑，靜置60秒後用洗滌瓶沖洗（沿載玻片流下）。

  5. 蓋上蓋玻片，用油鏡觀察。

• 菌種：E.coli

• 酸性染色：帶負電染劑，此處使用苯胺黑(Nigrosin)。

• 作法：

  1. 加1~2滴染劑在載玻片上。

  2. 用tip少量沾取培養盤上的菌體，在染劑中稍微攪拌。

  3. 用另一片載玻片推平溶液，再蓋上大片蓋玻片，用油鏡觀察。

• 菌種 : E.coli、B.subtilis。

• 發現：由丹麥醫生 Hans Christian Gram 發明。

• 作法：

1. 熱固定

2. 初染(Primary stain)：結晶紫，10秒。

↓ ddH₂O wash

3. 媒染(Mordant)：碘液(iodine)，10秒。

↓ ddH₂O wash

4. 去色(Decolorization)：95%酒精(EtOH)，10秒。

↓ ddH₂O wash

5. 回染(Counterstain)：番紅(safranin)，10秒。

↓ ddH₂O wash

6. 蓋上蓋玻片，用油鏡觀察。

• 結果:

由左表可知E.coli為革蘭氏陰性菌，而B.subtilis為陽性。