日ごろ研究室でよく使われる試薬の作り方のリストを作成しました。
皆さんの参考になればと思います。
注意：以下のリストはすでに公表されている論文などを参考にしておりますが、試薬を調整する際は自己責任でお願いいたします。
■10 x Cell / tissue lysis buffer
Tris Hcl-----30.3g
NaCl-----43.83ｇ
EDTA2Na-----1.86g
H2O-----400ml
↓
pH7.4に合わせる
↓
500mlにメスアップ
↓オートクレーブ
室温保存
■1% NP40 cell / tissue lysis buffer 100ml
10% NP40 (in DW) 10ml
10 x cell / tissue lysis buffer 10ml
DW 80ml
↓
室温保存
使用時はプロテアーゼインヒビターやフォスファターゼインヒビターを加える
■LB medium 1L
Bacto Tryptone 10g
Bacto Eeast Extract 5g
NaCl 10g
DW up to 1L
↓オートクレーブ
4℃保存
使用時は以下のアンピシリンまたはカナマイシン溶液を1/100量加える
■カナマイシン溶液 50mg/ml
カナマイシン塩酸塩 500mg
DW up to 10ml
↓フィルター滅菌 (省略可)
-20℃保存
■アンピシリン溶液 50mg/ml
アンピシリン500mg
DW up to 10ml
↓フィルター滅菌 (省略可)
-20℃保存
■2x 組換えアデノウイルス保存 buffer
組成：10mM Tris pH8.0, 100mM NaCl, 0.1% BSA, 50%Glycerol
Tris 121mg
NaCl 584mg
BSA 100mg
DWを40ml加える
↓
pHを8.0に合わせる
↓
DWで50mlにメスアップ
↓
グリセロールで100mlにメスアップ
↓
0.45umのフィルターに通す
↓
4℃保存
ウエスタンブロッティング用Buffer ①～⑪
①10×TG buffer (トランスファーで使用)
Tris 36.25g
グリシン 181.2g
DW up to 1L
↓
スターラーをまわして溶かす
↓
室温保存
②10× TBS buffer
Tris 60.6g
NaCl 87.6ｇ
DW 800ml
↓
スターラーでとかしてpHを7.6にする. 6mol/Lの塩酸50ml以上必要
↓
DWで１Lにする
↓
室温保存
③1×TBS-T 0.1% (洗浄用、ブロッキング用、抗体希釈用)
TBSを1×にして、Twwen20を0.1％分加える
↓
4℃保存
④10×runing(泳動)バッファー
Tris 30.3g
グリシン 144g
SDS 10g
DW up to 1L
↓
室温保存
⑤トランスファーバッファー
20％ or 10%メタノール in 1×TG
用事調整 作り置きは避ける
⑥5% Skim milk in 1×TBS-T (ブロッキング、抗体希釈用)
Skim milk 2g
1×TBS-T up to 40ml
↓
4℃保存
1週間以内に使用する
⑦10% 過硫酸アンモニウム（APS）
過硫酸アンモニウム 1g
DW up to 10ml
↓
-20℃保存
⑧20 % SDS
SDS 20g
DW up to 100ml
↓
室温保存
⑨ 2x SDS Protein Sample Buffer
グリセロール 2ml
1M Tris/HCl pH 6.8 1.2ｍl
SDS 0.4g
Bromophenol blue 2mg
DW up to 10ml
↓
室温保存
使用時にβ-メルカプトエタノール を10%ととなるように調整
⑩1M Tris HCl (pH6.8)
Tris 60.55g
H2O350ml
↓
1mol/L塩酸でpH 6.8に合わせる
↓
500mlにメスアップ
↓オーククレーブ
室温保存
⑪1.5 M Tris HCl (pH8.8)
Tris 90.83g
H2O 350,l
↓
1mol/L塩酸でpH 8.8に合わせる
↓
500mlにメスアップ
↓オーククレーブ
室温保存
■SNET buffer 1L
Tris 1.12g
EDTA 2Na 29.2g
SDS 5g
DW 800ml
↓
pH 8.0に合わせる
↓
DW up to 1L
↓
室温保存
■Proteinase sol (10mg (483u)/ml)
Proteinase K 100mg (Nakarai 29442-14)を10 mlのミリQ水で溶かす
→小分けにして-20℃保存
■High salt buffer for RNA extraction
1.2M Nacl /0.8M くえん酸三ナトリウム二水和物
Nacl 14.03g
くえん酸三ナトリウム二水和物 47.06g
DW up to 200ml
↓
オートクレーブ
↓
室温保存
■10x PBS
Nacl 160g
KCl 4g
リン酸 水素 ２ナトリウム 58g
リン酸 2水素 カリウム 4g
DW up to 2L
↓
オートクレーブ
↓
室温保存
■ミトコンドリア単離Buffer 以下①～④
① 2M Tris HCl 200ml
Tris 24.23g
DWup to 160ml
Adjust pH7.5 using HCl
DW up to 200ml
↓
室温保存
② 0.25M EDTA 200ml
EDTA 2Na 2H2O18.61g
固形化NaOH 2g程度
DW160ml
Adjust pH 7.4 using NaOH
DW up to 200ml
↓
室温保存
③ 0.1M DDT 10ml
DDT 15402mg
DW up to 10ml
↓
小分けにして-20℃保存
④ミトコンドリア単離実験直前に以下のように調整、当日使い切り
ショ糖 855.8mg (Final 250mM)
①25ul
②40ul
③100ul
プロテアーゼインヒビターカクテル
DW up to 10ml
■2次元電機泳動・その他用 Urea lysis buffer
For 200ml scale
Stook solution①
Urea (6M) 72.72g
Thiourea (2M) 30.48g
CHAPS (2%) 4g
TritonX100 (1%) 2ml
DW up to 195ml
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Store at room temp as stook solution①
Stook solution②
DDT 2g
DW up tp 10ml
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Store at -20℃ as stook solution②
③Adjust just before use
Stook solution① 9.5ml
Stook solution② 0.5ml
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Total 10ml