微生物專題

一・目的

這次實驗中我們學習操作三種不同的細菌培養和分離方法，Broth、Dish

二・實驗器材與材料

1. E. coli 大腸桿菌

2. 接種環

3. 三角玻棒

4. P20 Pipetman

5. 酒精

6. 酒精燈

7. 培養皿/培養基

8. Tube/培養液

三・實驗步驟

分區畫線法

1. 拿接種環在酒精燈上過火，滅菌，冷卻

2. 取少許大腸桿菌，在培養皿一角落來回畫線，線條不互相交叉

3. 接種環再過火，冷卻，從步驟2的線開使在另一角落來回畫線，線條不互相交叉

4. 接種環再過火，冷卻，從步驟3的線開使再剩餘空間中來回畫線，皆不與之前的線互相交叉

5. 蓋上培養皿蓋子，放進培養箱中等待一天

塗抹法

1. 三角玻棒浸泡酒精，在酒精燈上過火，滅菌，冷卻

2. 用Pipetman吸取10微升的大腸桿菌滴在培養皿上

3. 用三角玻棒將大腸桿菌平均塗抹於培養皿上

4. 蓋上培養皿蓋子，放進培養箱中等待一天

菌落懸浮法

1. 拿接種環在酒精燈上過火，滅菌，冷卻

2. 取少許大腸桿菌，將接種環置入培養液中在管中輕輕敲打邊緣使大腸桿菌掉入培養液中

3. 放進培養箱中等待一天

一・目的

這次實驗中我們以陽光照射時間和化學物質作為操作變因觀察他們如何影響細菌的生長。

二・實驗器材與材料

1. E. coli 大腸桿菌

2. 三角玻棒

3. 酒精

4. 酒精燈

5. 培養皿

6. 濾紙片

7. 無菌水

8. 蒜頭萃取液

9. Ampicillin

10. 漂白水

11. 漱口水

三・實驗步驟

化學物質

1. 三角玻棒浸泡酒精，在酒精燈上過火，滅菌，冷卻

2. 用Pipetman吸取10微升的大腸桿菌滴在培養皿上

3. 用三角玻棒將大腸桿菌平均塗抹於培養皿上

4. 將濾紙片貼在培養皿上，紙片之間還有和培養皿邊緣的距離不能太近，避免影響抑菌圈的觀察

5. 在紙片上滴上無菌水、蒜頭萃取液、漂白水、漱口水（Ampicillin已事先準備好了）

6. 蓋上培養皿蓋子，放進培養箱中等待一天

陽光

1. 三角玻棒浸泡酒精，在酒精燈上過火，滅菌，冷卻

2. 用Pipetman吸取10微升的大腸桿菌滴在培養皿上

3. 用三角玻棒將大腸桿菌平均塗抹於培養皿上

4. 重複1-3步驟三次，這時有三個有大腸桿菌的培養皿

5. 一培養皿照射陽光5分鐘，一培養皿照射陽光20分鐘，一培養皿不照射陽光

6. 蓋上培養皿蓋子，放進培養箱中等待一天

一・目的

學習操作細菌的簡單染色、負染色和格蘭氏染色。

二・實驗器材與材料

1. E. coli 大腸桿菌

2. B.s 枯草桿菌

3. 載玻片

4. 蓋玻片

5. 酒精燈

6. 鑷子

7. P20 Pipetman

8. 結晶紫

9. 碘

10. 酒精

11. 番紅

12. Nigrosin

13. 正立顯微鏡

14. 鏡油

三・實驗步驟

簡單染色

1. 滴10微升的水在載玻片上

2. 用Pipetman的Tip取大腸桿菌置入水中

3. 鑷子夾住載玻片在酒精燈上來回烘烤固定細菌直到無菌水全數蒸發

4. 滴上結晶紫

5. 蓋上蓋玻片，放在正立顯微鏡下用100倍物鏡觀察

負染色

1. 於載玻片邊緣滴上Nigrosin

2. 用Pipetman的Tip取大腸桿菌置於染劑中

3. 用另一載玻片將Nigrosin平均塗抹於有大腸桿菌的載玻片上

4. 蓋上蓋玻片，放在正立顯微鏡下用100倍物鏡觀察

格蘭氏染色

1. 將大腸桿菌和枯草桿菌固定在載玻片上

2. 滴上結晶紫，等待十秒將染劑沖掉

3. 滴上碘，等待十秒將染劑沖掉

4. 滴上酒精，等待十秒將染劑沖掉

5. 滴上番紅，等待十秒將染劑沖掉

6. 蓋上蓋玻片，放在正立顯微鏡下用100倍物鏡觀察

四・實驗結果

簡單染色

負染色

格蘭氏染色（大腸桿菌）

格蘭氏染色（枯草桿菌）