生物光譜分析

N.M.R.

(Nuclear Magnetic resonance)

原理

在量子的世界中,粒子會具有自旋的性質,而原子核也不例外.帶正電的原子核,在以某一特定角度自旋時,會產生一特定的磁場.而每個粒子只能有特定幾個自旋的角度,也就是只能產生特定幾種磁場.在無外界磁場的干擾下,其淨磁矩(磁矩向量總和)為零.而在施加一特定磁場後,那幾種特有的磁場便會顯現出來.而這些磁場的能量又有高低的差別,此即賽曼原理(Zeeman effect).

在一固定磁場的作用下,這些具有不同能量的磁場之間會有特定的能量差,也就是會吸收或放出特定頻率的能量.透過核磁共振儀,便可以找出這些特定的頻率.然而,以核磁共振儀測定不同化合物時,雖然測定目標同樣為氫原子,卻會發現儀器找到的共振頻率有所不同.那是因為氫原子核外側的電子雲分布也會有所影響.帶負電的電子本身會產生反磁場,抵消部分外界的磁場.因此,電子雲較厚的地方,原子核實際感應到的磁場較弱,此即遮蔽效應(shielding effect).

也因此,當得到不同的訊號時,科學家便可由此得知其周圍的電子分布情形,並進一步得知其分子的鍵結模式.

而在生物研究的方面,以多肽鍊分析為例,科學家常常使用TOCSY、NOESY兩種2D光譜來進行研究.圖上的每個座標中的X和Y,代表兩個不同氫原子的訊號.TOCSY所提供的是相距三個鍵結以內的氫原子訊號,而NOESY提供的則是 5Å 以內的氫原子訊號.因此,由下圖可知:

TOCSY所顯示的是同一個胺基酸之中,上下兩個氫的訊號(實線相連者).而通常第一個胺基酸的TOCSY訊號會接收不到,是因為第一個 N-H 常在溶於水後消失.而NOESY除了顯示胺基酸之中兩氫的訊號,亦會顯示胺基酸之間兩氫的訊號(虛線相連者).將兩圖重疊後,兩者皆有的座標即為某個胺基酸的訊號,而只有NOESY的座標即為兩兩胺基酸之間的氫的訊號.如此便可推得整個多肽鍊的結構.

實作練習

步驟:

  1. 以任意一點為起點.(由於TOCSY第一個點會不見,起點通常是藍色的NOESY)

  2. 以藍(胺基酸間)-藍紅(胺基酸內)-藍(胺基酸間)...的順序連線

若是反覆嘗試後仍然失敗,依舊以正向態度面對人生. 

(by 作者)

此二圖為2018清大暑期營第五組的前輩們所繪 

圖片來源:

2018清華大學生科暑期科培營-第五組       https://sites.google.com/site/2018nthusummercamp05/

Dictionary by WeiJin Tang (湯偉晉編寫的字典): electron cloud (電子雲)

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