微生物培養法

細菌生長控制

實驗一:紫外光照射

取相同菌液以塗抹法塗至兩個LBplate上，拿到太陽光下照射，分別作用5min與20min。對照組則為不照光。

放入37度培養箱隔天觀察並對比菌落數差異。

實驗二:化學藥劑感受性實驗

二、細菌染色

一、前情概要

為了觀察體積微小的微生物，利用染色方法來鑑別菌種對微生物的研究非常重要

染色方法：(1)Simple staining (簡易染色) 

                  (2)Nagative staining (負向染色)

                  (3)Gram staining (革蘭氏染色)                   

二、細菌塗抹

•固定菌體以染色並觀察

           •一片玻片最多可以放兩種菌

           •步驟：

•Gram staining (革蘭氏染色)

1.染色原理(第三大點之常見的細菌染色法有其詳細的原理解釋)

2.染色步驟：

(1)初染(Primary stain)：結晶紫(Crystal violet)，浸泡60秒鐘

⇓ ddH₂O wash(用擦手紙稍微擦乾玻片)

(2)媒染(Mordant)：碘液(Iodine)，浸泡10秒鐘

                ⇓ ddH₂O wash

(3)去色(Decolorization)：95% EtOH，浸泡10秒鐘

                ⇓ ddH₂O wash

(4)回染(Counterstain)：番紅(Safranin)，浸泡10秒鐘

                ⇓ ddH₂O wash

(注意：去色以及用ddH₂O清洗樣本時，請小心讓其流過樣品，切忌直接對樣品沖洗)

(名詞解釋：ddH₂O：滅菌H₂O)

3.菌種：玻片左側(大腸桿菌(E. coli))

玻片中間(大腸桿菌(E. coli) + 枯草桿菌(B. subtilis))

玻片右側(枯草桿菌(B. subtilis))

三、顯微鏡油鏡使用注意事項

1.使用油鏡

(1)先在低倍物鏡(10X、40X)下找到物體並移動至視野中央

(2)在玻片標本上蓋上蓋玻片低上鏡油

(3)轉動鼻輪，使100X物鏡對到玻片標本，注意物鏡鏡頭是否接觸到油

(4)利用細調節輪將物體對焦

(5)嚴禁再轉動鼻輪回到40X物鏡

2.觀察完畢

(1)先將100X油鏡轉開

(2)將載物台降下

(3)將玻片標本取下

(4)用棉花棒沾取95%酒精，擦拭油鏡鏡頭

三、課程概要——微生物的世界

• 微生物的定義與分類

  • 定義:肉眼無法直接看見的生物體

  • 常見分類:細菌、藻類、真菌、原生生物、病毒

• 微生物中的一些「怪胎」

  • Epulopisium fishelsoni

  • Candidatus (Ca.) Thiomargarita namibiensis

  • Candidatus (Ca.) Thiomargarita magnifica

  • 「怪胎」們的共同特性:存在於地球上非常極端且不易探查的環境

• 細菌的特性

  • 為原核細胞、單細胞生物，大多數具球狀、桿狀、螺旋狀中的一種形狀

  • 細菌細胞膜:為選擇性通透膜，能排出廢物與形成孢子，為大多數抗生素的作用目標

  • 莢膜:協助細菌黏附在宿主表面，也可抵禦巨噬細胞之攻擊，增加細菌的致病性

  • 纖毛:協助細菌黏附在宿主表面

  • 鞭毛:細菌的運動器官，分為週鞭毛、端鞭毛、多鞭毛、單鞭毛等類型。

  • 革蘭氏陽性菌:大部分會分泌成分為蛋白質的外毒素到細胞外，其毒性強，在高溫下容易變性

  • 革蘭氏陰性菌:大部分再細胞破裂時會釋出成分為LipidA的內毒素，其毒性較弱，可促進免疫反應

• 常見的細菌染色法

  • 簡單染色法:用單一染劑將菌體染色，以凸顯整個微生物體，使細胞的形狀和基本結構能被看見。

  • 負染色法:利用酸性染色,因染劑的負電性無法通過細胞表面(染色處理並非針對菌體本身),而可藉此將菌體細胞與背景區分。莢膜:協助細菌黏附在宿主表面，也可抵禦巨噬細胞之攻擊，增加細菌的致病性

  • 革蘭氏染色法(以下詳述)