La microscopie à deux photons

Quand utilise-t-on un microscope à deux photons ?

• Seulement si un échantillon (ou organisme entier) dépasse les 50 µm en profondeur. Sinon, un microscope confocal est souvent meilleur en résolution latérale et axiale.
• La microscopie à deux photons marche mieux dans les milieux diffusants comme nos tissus. Nous utilisons la fenêtre de transparence des tissus entre 700 - 1300 nm pour aller plus profondément. La profondeur est au maximum de 1 mm dans un tissu peu diffusant. Si nécessaire, la PF possède un 'pulse peaker', qui permet d'aller plus profondément. Voir ci-dessous les paramètres qui déterminent la profondeur d'excitation Zmax.
• Avec la PF, nous pouvons atteindre une distance de travail importante et aller jusqu'à 8 mm dans un objet 'transparent'.
• Nos résultats sont de belles images: standard 512x512 pixels ou des mosaïques en 2D et en 3D.

Equipements complémentaires

Pour les études in vivo :

• MouseOx monitoring: saturation en O2 d’hémoglobine, fréquence cardiaque et respiratoire...
• Tapis électrique chauffant avec 'feed-back' pour stabiliser la température de l'animal à 36°-37° C.
• Cadre stéréotaxique fait-maison pour immobiliser la tête d'un animal sous l'objectif.
• Petite salle de chirurgie petit animal, avec plusieurs postes d’anesthésie isoflurane, fraise dentaire pour craniotomie, microscope binoculaire NIKON...
• Petits équipements pour la préparation de colorants: balance de précision, bain ultrason, plaque chauffante..
• Pompe de perfusion et d'extraction.

Pour les études in vitro sur cultures cellulaires et tissu perfusé :

• Un incubateur Okolab pour microscope droit: 'stage top chamber'.

Quelques exemples d'images de microscopie à deux photons

Résultats imagerie en 3D des sphéroïdes avec cellules cancéreuses: