分子遺傳學實驗

授課教授:黃貞祥教授

壹、課程內容

一.北京鴨 (Pekin duck)

*學名：Anas platyrhynchos domesticus

*起源：原產華北，經美國選育成純白羽毛、體型碩大

*引進：民國43年由農復會引進台灣

*用途：世界知名品種，為北京烤鴨與櫻桃鴨原料

二.番鴨 (Muscovy duck)

*學名：Cairina moschata

*特徵：原產祕魯，面部有紅色肉瘤，善飛翔

*別稱：古稱麝香鴨，俗稱紅面鴨

*用途：肉質鮮美有香味，為冬令進補「薑母鴨」主要食材

三.土番鴨 (Mule duck)

*學名：Cairina duck

*來源：公番鴨與母菜鴨（或改鴨）之雜交品種

*特性：不具備生殖能力

*用途：優良肉用品種，佔台灣肉鴨消費市場約70%

四.PCR 聚合酶連鎖反應

*用途：放大特定片段DNA

*材料：DNA樣本、引子、DNA聚合酶、緩衝液（裡面需含鎂離子（輔酶））

*步驟條件：98°C 打破雙鍵 (10秒) → 55°C 讓引子附著(30秒) → 72°C DNA聚合(30秒) （正常細菌在72°C是無法存活的，所以這裡是用溫泉菌）

*用途：環境調查、醫學、基因檢測、核酸檢測

*引子的設計可以用電腦輔助但是有以下限制

①長度須在18～22bp之間

②G、C之間的鍵要佔40～60%

③變成單股的溫度需在55～65°C之間

④不要出現連續序列

⑤不要連在一起

⑥要是線性的

貳、實驗樣本與器材

一、聚合酶連鎖反應

（一）材料

2XPowerpol MasteMix(150μL)

ddH2O (300μL)

Duck DNA(Pekin, Mule, Muscovy 5μL each)

（二）工具

1.5 ml Eppendorf(2個)

八連PCR管 (1個)

（三）引子 ( 5μL each)

CHD primer (Forward)

CHD primer (Reverse)

CAUD006 primer (Forward)

CAUD006 primer (Reverse)

參、實驗原理

一、聚合酶連鎖反應:

利用特定序列的DNA，在眾多的DNA分子中運用基因複製的原理，尋找是否有我們需要的目標基因並將其放大。

二、DNA電泳

利用 DNA 分子帶負電的特性，在電場作用下向正極移動的原理進行分離。瓊脂糖膠如同分子篩網，小的 DNA 片段容易穿過膠孔，移動速度較快；大的 DNA 片段則較難通過，移動速度較慢。經過一段時間的電泳後，不同長度的 DNA 片段就會按照大小順序分離成清晰的條帶。

肆、實驗步驟

一、聚合酶連鎖反應

二、DNA電泳

依照上圖右下角之順序，個別將5μl到瓊脂凝膠洞中跑電泳，再去照UV

伍、實驗結果

一、聚合酶連鎖反應

跑膠完的照

跑膠後照UV後的照片

陸、實驗紀錄與檢討

這次實驗過程中我們進行得很順利，無論是加入 PCR 反應試劑、DNA 或是將試劑加進瓊脂凝膠中，都沒有遇到太多困難。然而最後跑膠的結果卻與預期不符，實驗出現了部分失敗的情況。雖然我們確認過膠片擺放與電極方向並無放反，但在與教授討論後，推測可能是微量加樣時產生微小誤差導致交叉污染，或是 DNA 模板濃度不佳影響了放大效果。這次的經歷讓我們深刻明白，生物實驗除了操作順暢外，細節的精準度更是決定成敗的關鍵，對我們來說是一次非常寶貴的實務經驗。

柒、參考資料來源

Page updated

Google Sites

Report abuse