花青素(anthocyanidin)的顏色會隨著環境的酸鹼值而有所變化,從酸性環境的紅色到紫色、再到鹼性環境下的藍綠色。
右圖為從紫高麗菜萃取出的花青素的顏色變化。
由上述可以知道,可透過觀察顏色來判斷已加入花青素的溶液的pH值,但直接用肉眼畢竟還是有誤差,也無法得到精確的pH值,所以本實驗就是要藉由儀器來測定溶液的透光度。
使用三種顏色(紅綠藍)的LED燈作為光源,光電二極體作為接收端、並將接收到的光轉換成電壓,在三用電表上顯示。
最後找到電壓與pH值的關係式,再以未知的溶液檢驗關係式是否正確。
我們先校準光電二極體,使得當使用無菌水作為受測液體時,任一光線的電壓值都在2.00。
由上右圖(R)可以看到,紅光的趨勢線斜率相較於其他二者低,所以我們懷疑pH值並不影響花青素對紅光的吸光度。因此,在我們推導最後的方程式時,我們嘗試捨去紅光的數據,只取綠、藍光對pH值做迴歸。
我們參考了多篇有關多元迴歸分析(Multiple regression analysis)的文章,輸入我們的數據,得到了一個方程式:
pH=8.668487248-14.26122313*B+13.80607771*G(其中pH代表溶液的pH值、B代表照藍光的電壓值、G代表照綠光的電壓值)
之後我們拿到兩個未知pH值的溶液。初步由顏色判斷,為一酸(粉色)一鹼(藍色)。用儀器測量的數據和計算出的pH值如右:
顯然地,藍色的pH值錯了。詢問助教的結果,粉色溶液的pH值為3.8、藍色為8.3。
我們開始思考哪裡出了差錯。我們覺得應該是:1. 在加入花青素時,pH9那管加的比較少了些,花青素的顏色便造成了實驗誤差。2. 數據可能需要處理,也許要取其差值。3. 方程式不一定是線性,可能是高次方甚至是指對數,但我們無從得知。4. 基於第三點,紅光的數據也可能出現在方程式裡,只不過不是以線性的方式出現。
透過這個實驗,我們體會了在未知裡溺斃的感受,嘗試了許多不同的方法、看了許多文章,仍找不到明確的方向;同時也學到了許多新知,像是:如何做多元迴歸分析、如何將Excel的表格轉成圖片、如何在教授質詢時保持冷靜......雖然最後結果不盡理想,但這就是研究、也就是我們之後時常要面對的事。