微生物學專題
微生物實驗
一.細菌分離
0.未分離的菌管中滿滿都是各式各樣的細菌，如下圖所示
來源：台大生命科學系 周信宏助理教授 大二微生物上課講義
1.劃線塗抹分離法：
1.原理：如下圖所示
來源：台大生命科學系 周信宏助理教授 大二微生物上課講義
2.做法：如下圖所示
來源：台大生命科學系 周信宏助理教授 大二微生物上課講義
3.實驗架設：
4.成果：
2.序列稀釋圖盤分離法：
1.原理如下圖所示：
來源：台大生命科學系 周信宏助理教授 大二微生物上課講義
3.菌落懸浮法：
此法主要用於菌液比濁實驗
用滅菌接種環挑取菌落或標本，在試管內壁與液面交界處輕輕研磨，使細菌均勻得散落在液體培養基中。
(來源：http://www.taiwanlab.com.tw/protocol/show.asp?id=4464)
2.實驗架設：
3.成果：
二.細菌生長與控制(照射太陽光長度與細菌生長數量的關係)
1.原理(主要為紫外光)：
因為陽光中含有紅外線與紫外線。紅外線可以蒸發水份，讓細菌脫水而死。紫外線可以使細胞核濃縮，而在細胞漿產生空泡，
使細菌死亡。 紅外線與紫外線雖然可以殺細菌，但也會殺死人類的細胞，所以也不要曝露在陽光太久。
(來源：http://linsuwen.myweb.hinet.net/why100.html)
2.預期值：
照光20分鐘的菌落數<照光5分鐘的菌落數<對照組(未照光)的菌落數
3.成果：
三.抑制EK生長的物質效果比較
1.實驗架設
(1)Ampicillin (2)蒜頭萃取液 (3)70%酒精 (4)漂白水10% (5)無菌水
2.成果：
3.討論：
4.理論與結論：
四.細菌染色
1.簡單染色法：
(1)目的及條件：已知菌種且為單一菌種，為了要方便在顯微鏡下清楚看見而做的染色
(2)過程：使用熱固定法固定EK於玻片上→使用Crystal violet染色→用蒸餾水沖洗多餘的染劑→蓋上載玻片並觀察
(3)成果
2.負染色法：
(1)使用時機及條件：常用於不透光液體標本的鏡檢。由於其染色處理過程並非針對菌體本身，故又稱「襯托染色法」、「間接染色法」。在負染色法中，標本不需要熱固定，細胞不會因為化學藥物的影響而變形，對於不易染色的細菌或病毒也能觀察。
(來源：https://zh.wikipedia.org/wiki/%E8%B4%9F%E6%9F%93%E8%89%B2%E6%B3%95)
(2)原理：負染色法需要使用酸性染料來染色，如伊紅或苯胺黑。因為細菌體表面帶負電，而酸性染料的色原也帶負電，所以色原只能將背景染色，才能使沒有染色的細胞很容易的被觀察到。一些染色劑，如四氧化鋨和鐵氰化鋨，化學活性非常強。作為強氧化劑，它們主要與交鍵類脂和不飽和碳碳鍵反應，從而改變樣本組織的生物膜特性並將其染色。
(來源：https://zh.wikipedia.org/wiki/%E8%B4%9F%E6%9F%93%E8%89%B2%E6%B3%95)
(3)過程：取一滴Nigrosin染劑滴於玻片邊緣→使用tip勾一點EK並與Nigrosin染劑均勻混合→使用另一個玻片塗抹→顯微鏡下觀察
(4)成果
3.革蘭氏染色法：
(1)使用目的與條件：細菌細胞壁上的主要成份不同，利用這種染色法，可將細菌分成兩大類，即革蘭氏陽性菌與革蘭氏陰性菌。這種染色法是由一位丹麥醫生漢斯·克里斯蒂安·革蘭於1884年所發明，最初是用來鑑別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關係。
這是辨別細菌種類的一個重要特性，對由細菌感染引起的疾病的臨床診斷及治療很有幫助。相對於容易導致人類疾病的革蘭氏陰性菌，革蘭氏陽性菌通常是益生菌，不會對人類致病，還能促進腸道菌種平衡。
革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌對抗生素的反應並不一樣。通過抽取樣品醫生可以在很短的時間內（5分鐘左右）確定細菌的革蘭氏性質。這樣，醫生就可以迅速的給病人注射抗生素，而不需要等待通過細菌培植得到的化驗結果，這往往需要幾天時間。
(2)原理：革蘭氏染色的對象是細菌的細胞壁。染色後的細菌可在顯微鏡下更好的觀察，以便於區分。不同的細菌在該染色法的作用底下反應不同，藉以區分成為兩類：
- 革蘭氏陽性細菌，胞壁染色後呈藍紫色
- 革蘭氏陰性細菌，染色後呈紅色。
(3)過程：使用熱固定法分別固定EK以及S.A→已2%Gram Crystal Violet染劑滴於載玻片上菌體→以蒸餾水清洗→加入碘液→以蒸餾水清洗→使用95%酒精進行脫色作用，直到酒精變成無色→加入第二種染劑Safrain→以蒸餾水清洗→在顯微鏡下觀察
(4)成果：EK(大腸桿菌)
S.A(金黃葡萄球菌)
五.問題、討論與相關網站
1.大腸桿菌的全名(E.coli)Escherichia coli
2.巴斯德滅菌法：
巴氏殺菌(Pasteurization)即低溫保持式殺菌法。亦稱低溫長時間殺菌法。是利用低于100攝氏度的熱力殺滅微生物的消毒方法，由德國微生物學家巴斯德于1863年發明，至今國內外仍廣泛應用于牛奶、人乳及嬰兒合成食物的消毒。新鮮原奶中的生物活性物質十分怕熱，如果用攝氏100度的消毒方法，則原奶中的生物活性物質將被破壞，而且原奶中的維生素、蛋白質等也有損失。巴斯德通過大量科學實驗證明，如果原奶加工時溫度超過85℃，則其中的營養物質和生物活性物質會被大量破壞，但如果低于85℃時，則其營養物質和生物活性物質被保留，并且有害菌大部分被殺滅，有些有益菌卻被存留。所以，將低于85℃的消毒法稱作巴氏消毒法，可以說，這是新鮮牛奶最科學、最好的加工工藝。采用巴氏滅菌法生產的鮮奶，其營養價值和保健功能與新鮮原奶基本相同。現用的巴氏殺菌方法一般有兩種：一是加熱到61.1～65.6攝氏度之間，30分鐘；二是加熱到71.7攝氏度，至少保持15秒鐘。由于巴氏消毒法所達到的溫度低，故達不到滅菌的程度。但是它可使布氏桿菌、結核桿菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌等致病微生物死亡，可以使細菌總數減少90％－95％，故能起到減少疾病傳播，延長物品的使用時間的作用。另外，這種消毒法不會破壞消毒食品的有效成份，且方法簡單。
(資料來源：http://big5.wiki8.com/bashishajun_108710/)
3.大腸桿菌專門網站：Ecocyc (https://ecocyc.org/)
4.EK蛋白質查詢：http://proteopedia.org/wiki/index.php/Main_Page