蛋白質電泳分析

DAY 3   全日課程 

授課老師 :  鄭惠春 教授

• 胺基酸介紹

• 蛋白質結構介紹

• SDS PAGE 原理、發展與實際操作

壹、實驗目的：

1. 學習蛋白質電泳之原理與應用範圍

2. 練習SDS PAGE之各步驟與操作

貳、實驗原理：

SDS-PAGE 的核心原理是藉由電泳與聚丙烯醯胺凝膠的分子篩效應，將蛋白質依「分子大小」分離。SDS 是一種陰離子界面活性劑，可使蛋白質變性並均勻地覆蓋負電荷，使所有蛋白質失去原有的結構與電荷差異，僅以「長度」區分。當施加電場時，所有蛋白質僅依分子量差異遷移。聚丙烯醯胺膠的網狀結構可限制分子通行速度，分子越小越容易穿透、移動越快。因此，SDS-PAGE 本質上是利用統一電荷與網狀介質實現的分子篩選電泳，是一種依蛋白質大小進行高解析度分離的技術。 

參、實驗藥品與器材：

器材

Pipetman、Tips、製膠架、製膠模具、電泳槽、Buffer、離心管、碎冰（保存藥劑用）

SDS PAGE 膠體

ddH₂O、Acrylamide/Bis 混合液、Tris-HCl、SDS、APS、TEMED

SAMPLE

肆、實驗步驟：

1. 將ddH₂O灌入模具觀察其是否漏水，若無則2~3分鐘後倒出，模具以紙巾擦乾。

2. 製作下膠（混合上述材料，APS和TEMED最後加以免膠體在倒入模具之前凝固）並倒入模具中，上層加入ddH₂O 覆蓋表面防止氧化。

3. 靜置模具約30分鐘使下膠凝固。

4. 製作上膠（混合上述材料，APS和TEMED最後加以免膠體在倒入模具之前凝固）並倒入模具中，上層加入ddH₂O 覆蓋表面。

5. 將齒梳插入模具中（注意：要使模具和齒梳完全貼合）。

6. 靜置模具約20分鐘使上膠凝固。

7. 將製好的膠裝入電泳槽，加入 running buffer。

8. 將樣品加入膠孔。

9. 蓋上電泳槽蓋，開始進行電泳。

10. 待tracking dye跑至接近膠體底部時停止電泳。

11. 取出膠體並切掉上膠，膠體送入儀器掃描，觀察電泳結果。